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baggio00009

銅蟲 (小有名氣)


[交流] 【求助/交流】求助,新手組培及細胞懸浮培養(yǎng)

大家好,我是新手做組培及細胞培養(yǎng),有幾個問題想問問大家。
1.我想問問做MS培養(yǎng)基的時候激素應該在滅菌之前加還是之后加?要是在滅菌之后加比較好的話,應該如何操作才能不染菌呢
2.我做的植物在懸浮細胞培養(yǎng)繼代的時候,我通常是過濾后取一定重量的細胞放入新培養(yǎng)基中,但是這種植物細胞很難過濾,很費時間,所以經(jīng)常會染菌,我很郁悶,不知道我這么做對不對,是不是有其他的什么解決辦法。
3. 有沒有細胞懸浮培養(yǎng)方面比較好的書或者材料推薦一下,最好是實驗方面的。不勝感激
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ziman2003

銀蟲 (小有名氣)


★ ★
baggio00009(金幣+1): 2011-02-16 17:24:58
baggio00009(金幣+1): 2011-02-18 02:00:21
dhd997(金幣+2): 歡迎交流 2011-02-18 10:54:02
baggio00009(金幣+1): 2011-02-22 17:59:09
您好!
我在研究生階段做了大量的組培工作,主要是愈傷和誘導的過程。
首先,對于你說的激素的問題,所有的激素,包括生長素,細胞分裂素等等,都是需要0.22um的過濾器除菌過濾。然后待滅菌后的培養(yǎng)基室溫涼至45度左右,加入激素。因為激素在高溫下容易降解的。
其次,我沒有做過細胞的懸浮培養(yǎng),你可以找一些組織培養(yǎng)教材看看。好像本科的組織培養(yǎng)教材中就有描述,或者有關(guān)組培的實驗指導技術(shù)。
希望對你有所幫助。
3樓2011-02-16 16:38:15
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dacaoyuan5330

木蟲 (小有名氣)


baggio00009(金幣+1): 2011-02-22 17:57:50
引用回帖:
Originally posted by kun2199 at 2011-02-16 18:44:13:
把槍頭剪了,用槍吸,按周繼代,開始的愈傷組織體積要大,質(zhì)量要好。

《體外培養(yǎng)的原理與技術(shù)》 薛慶善
這本書很好 講的很全面 你可以看看
7樓2011-02-18 15:53:20
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robocop

木蟲 (著名寫手)



小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包,謝謝回帖
基本上人工合成的都可以高溫,提取的不行,比如玉米素,赤霉素就只能過濾了,有的赤霉素也高溫,反正會死活一部分,一個濃度梯度的都失活了50%的話 也還是一個梯度
15樓2012-05-19 00:17:30
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普通回帖

wqj1988926

金蟲 (正式寫手)


★ ★ ★
dhd997(金幣+3): good 2011-02-16 10:39:34
baggio00009(金幣+1): 2011-02-16 17:25:06
baggio00009(金幣+1): 2011-02-22 17:59:17
1.我們實驗室一般都是加好后高溫滅菌的
2.如需定量的話,將天平置于超凈臺紫外照射滅菌后,將培養(yǎng)器皿整體放入調(diào)零,定量初始細胞量
3關(guān)于書籍方面可以去你們的圖書館看看,我一般在我們圖書館能滿足我的需求。
2樓2011-02-16 08:45:32
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dacaoyuan5330

木蟲 (小有名氣)


baggio00009(金幣+1): 2011-02-18 02:00:15
好像有本書 專門介紹怎樣做細胞培養(yǎng)的 暫時忘記了 過后告訴你
4樓2011-02-16 17:22:26
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kun2199

金蟲 (小有名氣)


baggio00009(金幣+1): 2011-02-18 02:00:04
把槍頭剪了,用槍吸,按周繼代,開始的愈傷組織體積要大,質(zhì)量要好。
5樓2011-02-16 18:44:13
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baggio00009

銅蟲 (小有名氣)


引用回帖:
Originally posted by dacaoyuan5330 at 2011-02-16 17:22:26:
好像有本書 專門介紹怎樣做細胞培養(yǎng)的 暫時忘記了 過后告訴你

好的,謝謝
6樓2011-02-18 01:59:24
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lichunlimy

銀蟲 (初入文壇)



dhd997(金幣+1): 本版塊有很多類似問題,可以搜索,多學習一下,你會進步的。 2011-02-22 09:47:22

哇 都是些高手啊  ,我看我還是得喝你們好好學習才行啊  好像看了我什么都不懂啊
8樓2011-02-22 09:02:49
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wylee01

禁蟲 (正式寫手)


rainwander(金幣+1): 鼓勵積極參與交流~~~ 2011-02-24 15:31:12
本帖內(nèi)容被屏蔽

9樓2011-02-24 14:11:49
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粉色蝸牛

銅蟲 (小有名氣)


要看是何種激素, 如果不耐高溫的,那就要過濾滅菌了。
10樓2011-02-24 15:29:22
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曾經(jīng)遙遠

銀蟲 (正式寫手)


引用回帖:
Originally posted by ziman2003 at 2011-02-16 16:38:15:
您好!
我在研究生階段做了大量的組培工作,主要是愈傷和誘導的過程。
首先,對于你說的激素的問題,所有的激素,包括生長素,細胞分裂素等等,都是需要0.22um的過濾器除菌過濾。然后待滅菌后的培養(yǎng)基室溫涼至 ...

學長你好,我想問一下滅菌后的培養(yǎng)基添加激素怎么操作才能使培養(yǎng)基不受污染呢?
11樓2011-02-25 10:13:10
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桃子老好吃

金蟲 (小有名氣)


★ ★
看天(金幣+2): 鼓勵交流 2011-03-20 18:35:13
大多數(shù)激素還是耐高溫的吧,我們都是加了再滅的啊,不耐高溫的話,再用過濾頭在無菌操作臺里加進去
12樓2011-03-17 22:58:51
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jiebingzh

木蟲 (小有名氣)


★ ★
看天(金幣+2): 鼓勵 2011-03-20 18:35:04
如果所加激素在經(jīng)過高壓滅菌后失活,則需要將培養(yǎng)基先高壓后再添加過濾滅菌的激素,然后將培養(yǎng)基搖勻并進行分裝。這樣操作量好控制。
細胞懸浮培養(yǎng)應該是用槍頭來吸取一定體積的吧,具體的沒操作過
13樓2011-03-20 17:41:40
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lywac

銅蟲 (小有名氣)


我做的都是加了以后在滅菌的!比如NAA BA 和2,4--D
14樓2011-03-28 11:00:42
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ruohanlqx

金蟲 (初入文壇)



小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包,謝謝回帖
司徒鎮(zhèn)強 《細胞培養(yǎng)》
16樓2013-03-28 20:32:01
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Bella0224

金蟲 (小有名氣)



小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包,謝謝回帖
激素要在超凈工作臺里,利用0.22um的過濾器進行除菌過濾,你可以下在外面將激素粉末溶解好,然后再在超凈工作臺里進行過濾,需要購買過濾器和注射器,找一個也是滅菌的離心管之類的,看你自己啦,然后用1.5mlEP管進行分裝,保存在-20度~

激素和抗生素都可以配置1000×的母液,就是把你的目的濃度擴大1000倍,加的時候槍頭要用滅菌過的,按照相應體積比例縮小加就行了~

加激素要等到滅菌后的培養(yǎng)基室涼至不燙手,溫和的時候就差不多了,我們一般就是40度左右,激素在高溫下會降解
17樓2013-04-03 15:03:22
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Bella0224

金蟲 (小有名氣)


引用回帖:
1335363樓: Originally posted by 曾經(jīng)遙遠 at 2011-02-25 10:13:10
學長你好,我想問一下滅菌后的培養(yǎng)基添加激素怎么操作才能使培養(yǎng)基不受污染呢?...

所有的東西都要滅菌,包括槍頭,包括培養(yǎng)基,包括你過濾后加入的容器(如離心管),在超凈工作臺操作,要點燃酒精燈,一般的話是不會染菌的
18樓2013-04-03 15:05:01
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