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baby1_9253344

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[交流] 【求助/交流】請(qǐng)問(wèn)如何計(jì)算某融合蛋白的分子量

如題，最近要將攜帶目的基因的pET29a轉(zhuǎn)入BL21(DE3)表達(dá)目的蛋白，知道目的基因的序列，大概1kb大��；知道pET29a含有His Tag和S-Tag，但具體不清楚目的蛋白和哪個(gè)Tag融合的。想要計(jì)算表達(dá)出的蛋白的分子量。
現(xiàn)有如下疑問(wèn)：
1，如何確認(rèn)目的基因和哪個(gè)標(biāo)簽融合（在文獻(xiàn)沒(méi)有明確說(shuō)明的情況下）
2，如何計(jì)算融合蛋白的大小

先在此謝過(guò)了~

[ Last edited by baby1_9253344 on 2011-2-25 at 11:25 ]

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1樓 2011-02-25 10:35:57

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brightfuture01

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baby1_9253344(金幣+1): 3Q 2011-02-25 10:51:37
dhd997(金幣+3): good 2011-02-25 15:19:44

表達(dá)之前沒(méi)有將質(zhì)粒送去測(cè)序確認(rèn)一下有沒(méi)有發(fā)生點(diǎn)突變或者其他突變？

測(cè)序的話就知道跟哪個(gè)標(biāo)簽融合了，然后根據(jù)翻譯過(guò)來(lái)的氨基酸計(jì)算理論分子量。

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2樓2011-02-25 10:39:45

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baby1_9253344

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Originally posted by brightfuture01 at 2011-02-25 10:39:45:
表達(dá)之前沒(méi)有將質(zhì)粒送去測(cè)序確認(rèn)一下有沒(méi)有發(fā)生點(diǎn)突變或者其他突變？

測(cè)序的話就知道跟哪個(gè)標(biāo)簽融合了，然后根據(jù)翻譯過(guò)來(lái)的氨基酸計(jì)算理論分子量。

沒(méi)有測(cè)序...只有測(cè)序這一個(gè)方法嗎？
我從文獻(xiàn)里看到目的基因片段是BamHI/NdeI酶切的，然后查了一下pET29a的序列，酶切位點(diǎn)那一段是這樣的：
PETupstraim primer M69214-3 --- T7 promotor --- ...(省略中間的)... --- NdeI --- S Tag --- ... --- BamHI --- ... --- His Tag ---...
是不是這樣的話，S Tag應(yīng)該酶切的時(shí)候被切掉了，所以只有His tag?

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3樓2011-02-25 10:48:56

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aofeng860308

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測(cè)序，軟件將ORF翻譯成氨基酸序列計(jì)算分子量。

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5樓2011-02-25 20:31:12

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laoshu16

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測(cè)序唄又快又準(zhǔn) 然后軟件計(jì)算分子量就ok了

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6樓2011-02-25 20:34:31

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baby1_92533444樓

2011-02-25 14:31 回復(fù)

引用回帖:

Originally posted by baby1_9253344 at 2011-02-25 10:35:57: 如題，最近要將攜帶目的基因的pET29a轉(zhuǎn)入BL21(DE3)表達(dá)目的蛋白，知道目的基因的序列，大概1kb大��；知道pET29a含有His Tag和S-Tag，但具體不清楚目的蛋白和哪個(gè)Tag融合的。想要計(jì)算表達(dá)出的蛋白的分子量。現(xiàn)有 ...

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