 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 1713 | 回復: 13 | ||
samqueenw銀蟲 (初入文壇)
|
[求助]
融合蛋白表達只出現(xiàn)前半部分蛋白條帶 已有4人參與
|
|
|
最近做融合蛋白，pet21a做載體，融合21kd和28kd的蛋白 構建后的載體經測序沒有問題，前邊21KD蛋白的終止密碼子已經被去除，但是表達誘導后SDS凝膠電泳只在21KD的位置有表達條帶（表達條件：37度；分別試了OD600=0.5,0.7,1.0; IPTG終濃度為0.3,0.5,1.0mM；誘導1h，3h，過夜。最后發(fā)現(xiàn)只要誘導過夜，就會有出現(xiàn)表達條帶） 請各位做過融合蛋白的高手賜教啊  |
回復此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經有0人回復
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經有289人回復
-
蛋白質檢測：精準分析，解鎖生物分子的密碼
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設計，解析生命機制的重要載體
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經有0人回復
-
納米粒度分析
已經有3人回復
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經有0人回復
» 本主題相關價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 蛋白異源表達，條帶大小不對啊
已經有12人回復
- 蛋白表達不出來，是什么原因造成的
已經有7人回復
- 求助關于融合蛋白的linker連接問題
已經有10人回復
- 融合表達蛋白酶的表達
已經有26人回復
- 蛋白表達不出來是怎么回事？
已經有12人回復
- 請問pET30b這個載體在IPTG誘導后有沒有可能表達除了目的蛋白以外的其他蛋白？
已經有16人回復
- 求助！關于GST融合蛋白純化！樓主愁得一夜沒有睡好！
已經有20人回復
- His Tag融合蛋白純化
已經有8人回復
- 畢赤表達一酶基因，跑蛋白電泳只有一條帶，是不是不用純化了呀
已經有10人回復
- 共表達載體只表達出一個蛋白
已經有21人回復
- gst標簽蛋白的表達和純化
已經有17人回復
- 融合蛋白的linker怎么設計
已經有14人回復
- 蛋白電泳 時間變短 條帶異常
已經有18人回復
- 原核表達蛋白誘導不出來
已經有16人回復
- GST融合蛋白純化求助 �。�！
已經有19人回復
- 辣根過氧化物酶（HRP）能與其他蛋白融合表達嗎？？
已經有4人回復
- 融合蛋白在大腸桿菌中的表達，怎么被我越做越復雜了？
已經有8人回復
- 畢赤酵母怎么表達不出融合蛋白？
已經有14人回復
- 【求助/交流】請問如何計算某融合蛋白的分子量
已經有5人回復
- 【求助/交流】重組蛋白融合標簽的選擇
已經有6人回復
- 【求助/交流】大腸桿菌中蛋白表達量偏低，大家有什么建議？
已經有28人回復
- 【求助/交流】蛋白誘導表達不出目標條帶
已經有41人回復
- 【求助/交流】原核表達蛋白純化
已經有29人回復
- 【求助/交流】MBP融合蛋白活性低？
已經有10人回復
chlorella409
木蟲 (正式寫手)
- 應助: 88 (初中生)
- 金幣: 3245.6
- 散金: 1000
- 紅花: 4
- 帖子: 376
- 在線: 182.4小時
- 蟲號: 1600249
- 注冊: 2012-02-05
- 性別: GG
- 專業(yè): 蛋白質組學
4樓2013-12-13 08:41:07
fuyuandj86
版主 (著名寫手)
己所不欲，勿施于人
- 應助: 397 (碩士)
- 貴賓: 0.015
- 金幣: 7575.7
- 散金: 493
- 紅花: 60
- 沙發(fā): 2
- 帖子: 1312
- 在線: 1386.9小時
- 蟲號: 544795
- 注冊: 2008-04-13
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物化學
- 管轄: 生物科學
【答案】應助回帖
★ ★ ★
samqueenw(kx444555代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵交流 2013-12-20 15:26:26
samqueenw(kx444555代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵交流 2013-12-20 15:26:26
|
樓主這種情況我也遇到過,以下是我的經驗,希望對你能有幫助: 我有一個蛋白怎么表達都不溶,沒有辦法了只好做了個融合蛋白,N端的是可溶的標簽蛋白 但是IPTG誘導表達的結果是只看到了對應于融合的N端的可溶標簽蛋白有很強誘導條帶, 融合蛋白的全長條帶很弱或者幾乎看不到. 用N端his-tag做純化可以拿到混合物,其中對應于前半部分的條帶明顯比對應于融合蛋白全長的條帶要深 我把全長融合蛋白用HPLC分離出來, 然后用酶把融合蛋白從中間切開,結果后半部分就全部都沉淀了,上清夜里只有前半部分 我推測是因為融合蛋白的后半部分本身不能正確折疊, 所以e.coli.的某種機制就會傾向于把折疊和溶解度特別好的前半部分切下來. 而且對于融合蛋白來說, 兩個融合部分的連接處本來也沒有結構,也容易被各種蛋白酶非特異性地切開 |
6樓2013-12-20 03:42:31
samqueenw
銀蟲 (初入文壇)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 297
- 散金: 50
- 帖子: 25
- 在線: 41.8小時
- 蟲號: 2466403
- 注冊: 2013-05-15
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物化學
2樓2013-12-05 13:12:33
samqueenw
銀蟲 (初入文壇)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 297
- 散金: 50
- 帖子: 25
- 在線: 41.8小時
- 蟲號: 2466403
- 注冊: 2013-05-15
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物化學
3樓2013-12-13 08:33:25
samqueenw
銀蟲 (初入文壇)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 297
- 散金: 50
- 帖子: 25
- 在線: 41.8小時
- 蟲號: 2466403
- 注冊: 2013-05-15
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物化學
5樓2013-12-19 21:24:08
7樓2013-12-20 09:44:24
15879003030
銅蟲 (小有名氣)
- 應助: 18 (小學生)
- 金幣: 57.2
- 散金: 20
- 紅花: 1
- 帖子: 96
- 在線: 33.7小時
- 蟲號: 2594622
- 注冊: 2013-08-13
- 專業(yè): 生物化學
8樓2013-12-20 10:28:59
b6122
木蟲 (正式寫手)
- 應助: 37 (小學生)
- 金幣: 2987.9
- 散金: 1000
- 紅花: 5
- 帖子: 636
- 在線: 46.9小時
- 蟲號: 172913
- 注冊: 2006-01-20
- 專業(yè): 生物醫(yī)用高分子材料
9樓2013-12-20 11:22:39
chlorella409
木蟲 (正式寫手)
- 應助: 88 (初中生)
- 金幣: 3245.6
- 散金: 1000
- 紅花: 4
- 帖子: 376
- 在線: 182.4小時
- 蟲號: 1600249
- 注冊: 2012-02-05
- 性別: GG
- 專業(yè): 蛋白質組學
10樓2013-12-20 13:00:13
相關版塊跳轉
我要訂閱樓主 samqueenw 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 初始318分求調劑（有工作經驗） +3 | 1911236844 2026-03-17 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 化學求調劑 +4 | 臨澤境llllll 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 265求調劑 +9 | 梁梁校校 2026-03-17 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 307求調劑 +10 | 冷笙123 2026-03-17 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 297求調劑 +9 | 戲精丹丹丹 2026-03-17 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 材料 336 求調劑 +3 | An@. 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 311求調劑 +5 | 冬十三 2026-03-18 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 308求調劑 +3 | 阿姐阿姐家啊 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求調劑，一志愿:南京航空航天大學大學 ，080500材料科學與工程學碩，總分289分 +4 | @taotao 2026-03-19 | 4/200 |
|
|
|
[考研] A區(qū)線材料學調劑 +5 | 周周無極 2026-03-20 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿西南交通 專碩 材料355 本科雙非 求調劑 +5 | 西南交通專材355 2026-03-19 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 353求調劑 +3 | 拉鉤不許變 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考博] 招收博士1-2人 +3 | QGZDSYS 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0703化學調劑 +10 | 妮妮ninicgb 2026-03-15 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 一志愿985，本科211，0817化學工程與技術319求調劑 +10 | Liwangman 2026-03-15 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 0854可跨調劑，一作一項核心論文五項專利，省、國級證書40+數(shù)一英一287 +8 | 小李0854 2026-03-16 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 材料工程專碩274一志愿211求調劑 +6 | 薛云鵬 2026-03-15 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 326求調劑 +4 | 諾貝爾化學獎覬?/a> 2026-03-15 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 327求調劑 +6 | 拾光任染 2026-03-15 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 289求調劑 +4 | 這么名字咋樣 2026-03-14 | 6/300 |
|