 |
 |
 |
| 24小時(shí)熱門版塊排行榜 |
- >論壇更新日志 (6130)
- >導(dǎo)師招生 (1275)
- >考研 (1189)
- >文獻(xiàn)求助 (452)
- >蟲(chóng)友互識(shí) (441)
- >休閑灌水 (232)
- >基金申請(qǐng) (166)
- >考博 (155)
- >招聘信息布告欄 (137)
- >碩博家園 (132)
- >論文投稿 (112)
- >博后之家 (91)
- >綠色求助(高懸賞) (45)
- >SciFinder/Reaxys (37)
- >論文道賀祈福 (33)
- >找工作 (33)
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 2617 | 回復(fù): 10 | |||
Anson1358鐵桿木蟲(chóng) (著名寫手)
|
[交流]
【求助/交流】MBP融合蛋白活性低？ 已有5人參與
|
|
我在用MBP tag表達(dá)蛋白，親和純化后得到的融合蛋白，測(cè)定活性。發(fā)現(xiàn)活性很低，用factor Xa酶切，切完之后跑電泳發(fā)現(xiàn)有MBP，目的蛋白卻不見(jiàn)了，是怎么回事？小弟都要愁死啦，實(shí)驗(yàn)做不出來(lái)沒(méi)法畢業(yè)��！敬請(qǐng)各位高人指點(diǎn)！ 大家都是怎么做的？ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有129人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 求助：兩種蛋白融合原核表達(dá)的問(wèn)題
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 低溫誘導(dǎo)蛋白表達(dá)時(shí)用多少度合適？
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 重組酵母表達(dá)了，但是蛋白沒(méi)有了活力是什么原因
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 怎么做融合蛋白？
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 熒光融合蛋白檢測(cè)目的基因的表達(dá)
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 求助關(guān)于融合蛋白的linker連接問(wèn)題
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 蛋白表達(dá)不出來(lái)是怎么回事？
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 各位，你們實(shí)驗(yàn)室用來(lái)做GST融合蛋白純化的柱子都是哪里買的？
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 求助！關(guān)于GST融合蛋白純化！樓主愁得一夜沒(méi)有睡好！
已經(jīng)有20人回復(fù)
- His Tag融合蛋白純化
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 融合蛋白的linker怎么設(shè)計(jì)
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 融合蛋白在不同細(xì)胞系表達(dá)
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 融合蛋白不掛柱，急！
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 進(jìn)行羥胺裂解后，進(jìn)行蛋白的二次過(guò)親和層析住純化問(wèn)題！�。�！求助啊 �。�！
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 最近純化融合蛋白，請(qǐng)問(wèn)透析需要加PMSF嗎？
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 融合蛋白在大腸桿菌中的表達(dá)，怎么被我越做越復(fù)雜了？
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【求助/交流】融合蛋白linker的選擇
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助/交流】請(qǐng)問(wèn)如何計(jì)算某融合蛋白的分子量
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】如何降低，多克隆抗體非特異性？
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 【求助/交流】重組蛋白融合標(biāo)簽的選擇
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于GFP融合的蛋白的一些問(wèn)題
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助/交流】MBP融合蛋白的Amylose親和層析
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 【求助/交流】大腸桿菌中蛋白表達(dá)量偏低，大家有什么建議？
已經(jīng)有28人回復(fù)
Anson1358
鐵桿木蟲(chóng) (著名寫手)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 6449.5
- 散金: 794
- 紅花: 3
- 沙發(fā): 19
- 帖子: 1153
- 在線: 674.9小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 627110
- 注冊(cè): 2008-10-15
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
2樓2010-04-24 09:12:10
goodwish
木蟲(chóng) (正式寫手)
木蟲(chóng)書呆子
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 1483.6
- 帖子: 496
- 在線: 24.9小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 673634
- 注冊(cè): 2008-12-13
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
Anson1358(金幣+6): 2010-04-24 17:51
|
使用MBP tag有一個(gè)問(wèn)題，就是MBP表達(dá)效率太高，拖著后面的蛋白快速表達(dá)，而導(dǎo)致你的目的蛋白沒(méi)有折疊好。 用蛋白酶切完后跑電泳，染膠的時(shí)候不要去掉濃縮膠，染完后注意看一下濃縮膠和分離膠之間是不是有一條帶。如果有，那證明你的蛋白沒(méi)有折疊好，切除前面的tag后聚集在一起形成大的復(fù)合體，跑不進(jìn)分離膠。 如果出現(xiàn)這種情況，那你可以嘗試在親和純化之后先過(guò)一個(gè)分子篩，看一下融合蛋白有沒(méi)有聚集，把沒(méi)有聚集的部分回收再用蛋白酶切。 如果依然聚集，那沒(méi)辦法了，換載體吧。 |
3樓2010-04-24 10:56:58
Anson1358
鐵桿木蟲(chóng) (著名寫手)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 6449.5
- 散金: 794
- 紅花: 3
- 沙發(fā): 19
- 帖子: 1153
- 在線: 674.9小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 627110
- 注冊(cè): 2008-10-15
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
4樓2010-04-25 10:27:05
goodwish
木蟲(chóng) (正式寫手)
木蟲(chóng)書呆子
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 1483.6
- 帖子: 496
- 在線: 24.9小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 673634
- 注冊(cè): 2008-12-13
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
5樓2010-04-27 10:41:38
Anson1358
鐵桿木蟲(chóng) (著名寫手)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 6449.5
- 散金: 794
- 紅花: 3
- 沙發(fā): 19
- 帖子: 1153
- 在線: 674.9小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 627110
- 注冊(cè): 2008-10-15
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
6樓2010-04-27 20:47:45
Anson1358
鐵桿木蟲(chóng) (著名寫手)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 6449.5
- 散金: 794
- 紅花: 3
- 沙發(fā): 19
- 帖子: 1153
- 在線: 674.9小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 627110
- 注冊(cè): 2008-10-15
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
7樓2010-04-27 20:48:29
★
小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
西瓜: 建議您單獨(dú)發(fā)個(gè)帖子。在論壇版面的“MolEPI 牛人榜”下面，點(diǎn)擊“撰寫主題”的按鈕就可以發(fā)帖了。 2012-03-10 14:49:11
小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
西瓜: 建議您單獨(dú)發(fā)個(gè)帖子。在論壇版面的“MolEPI 牛人榜”下面，點(diǎn)擊“撰寫主題”的按鈕就可以發(fā)帖了。 2012-03-10 14:49:11
你好，看到你幾個(gè)月前發(fā)的貼子，有問(wèn)題想請(qǐng)教一下。我現(xiàn)在也想把純化過(guò)的MBP融合蛋白進(jìn)行Xa因子蛋白酶酶切，請(qǐng)問(wèn)一下你是放在4度切的嗎？酶切完在過(guò)柱子之前先跑個(gè)膠？切完怎么把蛋白酶給除去�。� 我最關(guān)心的是最后一個(gè)問(wèn)題 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
夏至19908樓2012-03-10 13:56:09
9樓2014-01-26 23:30:01
10樓2015-11-23 15:03:44
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 Anson1358 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 085601求調(diào)劑 +4 | Du.11 2026-03-16 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 本人考085602 化學(xué)工程 專碩 +16 | 不知道叫什么！ 2026-03-15 | 18/900 |
|
|
[考研] 求調(diào)劑，總分315，考的生物醫(yī)藥，一志愿湖南師范大學(xué)。調(diào)劑到任何專業(yè)都可以 +4 | 小丁想進(jìn)步 2026-03-11 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 303求調(diào)劑 +3 | 睿08 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 271求調(diào)劑 +12 | 生如夏花… 2026-03-11 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 302求調(diào)劑 +4 | 小賈同學(xué)123 2026-03-15 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 267一志愿南京工業(yè)大學(xué)0817化工求調(diào)劑 +6 | SUICHILD 2026-03-12 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 278求調(diào)劑 +3 | Yy7400 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 機(jī)械專碩325，尋找調(diào)劑院校 +3 | y9999 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 070300化學(xué)學(xué)碩求調(diào)劑 +6 | 太想進(jìn)步了0608 2026-03-16 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 材料與化工一志愿南昌大學(xué)327求調(diào)劑推薦 +7 | Ncdx123456 2026-03-13 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 290分有科研經(jīng)歷，論文在投 +7 | 膩膩gk 2026-03-14 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 26考研一志愿中國(guó)石油大學(xué)(華東)305分求調(diào)劑 +3 | 嘉年新程 2026-03-15 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 080500，材料學(xué)碩302分求調(diào)劑學(xué)校 +4 | 初識(shí)可樂(lè) 2026-03-14 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 中科大材料與化工319求調(diào)劑 +3 | 孟鑫材料 2026-03-14 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 289求調(diào)劑 +4 | 這么名字咋樣 2026-03-14 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 266求調(diào)劑 +4 | 學(xué)員97LZgn 2026-03-13 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 332求調(diào)劑 +3 | zjy101327 2026-03-11 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 289求調(diào)劑 +3 | 李政瑩 2026-03-12 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 081200-11408-276學(xué)碩求調(diào)劑 +3 | 崔wj 2026-03-12 | 4/200 |
|