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wqf@126.com銀蟲(chóng) (正式寫手)
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[交流]
【求助/交流】蛋白質(zhì)的陰離子交換純化 已有12人參與
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各位大俠： 我做的蛋白等電點(diǎn)是4.3，用PH=7.4的PBS緩沖液作為A液來(lái)平衡柱子，該緩沖液不含NaCl，結(jié)果出乎意料的是我的蛋白質(zhì)竟然不能結(jié)合到柱子上去，而直接從柱子里穿透出來(lái)，這是為什么呢？ |
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- 專業(yè): 環(huán)境微生物學(xué)
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小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
rainwander(金幣+2): 鼓勵(lì)積極參與交流~~~ 2011-03-07 19:53:43
小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
rainwander(金幣+2): 鼓勵(lì)積極參與交流~~~ 2011-03-07 19:53:43
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加熱是否對(duì)目標(biāo)蛋白質(zhì)有影響，怎么上柱前不測(cè)定？最好每一步都有蛋白質(zhì)總量和目標(biāo)蛋白質(zhì)總量和活性的數(shù)據(jù)，不然出了問(wèn)題也不知道在哪里出，或者出了問(wèn)題還不能及時(shí)發(fā)現(xiàn)。 陰離子交換層析需要低鹽吸附，高鹽洗脫，所以平衡液和蛋白質(zhì)樣品的離子濃度都不能高。你的目標(biāo)蛋白質(zhì)等電點(diǎn)在4.3，平衡液的pH值為7.4，產(chǎn)生的電荷差距足夠吸附有余了，所以不能吸附的原因是蛋白質(zhì)早就失去活性，怎么測(cè)都測(cè)不到，或者平衡液和蛋白質(zhì)樣品離子濃度過(guò)高，樣品沒(méi)能被吸附就被洗脫。注意過(guò)電導(dǎo)率cond%嗎？ 無(wú)圖無(wú)真相，如果是用AKTA的，把圖截下來(lái)發(fā)上來(lái)。如果是用自動(dòng)收集儀的，就盡量獲得離子強(qiáng)度的測(cè)定方法，弄個(gè)電導(dǎo)儀。 |
5樓2011-03-07 16:41:24
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