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chenting100鐵蟲 (初入文壇)
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【求助/交流】求助，急�。。� 已有4人參與
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cDNA序列3000kb，用ExTaq和LATaq都擴(kuò)gDNA都擴(kuò)不出來，有什么其他的辦法嗎？ 聽說有一種Takara的酶，可以分段設(shè)計引物，把擴(kuò)增每一小段拼接出來，有哪位大俠知道嗎，指導(dǎo)一下，不勝感激啊 |
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yabxxh
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4樓2011-03-11 15:01:46
路人甲007
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2樓2011-03-11 14:46:54
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小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
amisking(金幣+2): 鼓勵發(fā)帖交流。 2011-03-11 20:53:46
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| 請問你是從cDNA里面RT-PCR擴(kuò)增嗎？怎么會有g(shù)DNA。是的話，那你可以用拼接PCR的方法來做。簡單地說就是你設(shè)計一對全長引物，然后設(shè)計一對中間引物，大概在1500bp的位置，這一對中間引物必須是反向互補的，他們分別和全長引物擴(kuò)增得到兩端序列，然后這兩端序列之間退火，用全長引物進(jìn)行拼接PCR，就會得到你的基因了。特別提到的是酶必須用不加A尾的pfu酶，TAKARA的primer star就可以了，片段GC含量高的話，用相應(yīng)的GC Buffer。好運。 |
3樓2011-03-11 14:59:34
chenting100
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5樓2011-03-14 11:27:19
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