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【求助/交流】有沒(méi)有人用Luminex 200 測(cè)過(guò)mRNA的表達(dá)量？
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求用Luminex 200 測(cè)mRNA表達(dá)量的技術(shù)資料，要盡可能詳細(xì)的操作步驟，不是產(chǎn)品說(shuō)明書 獎(jiǎng)勵(lì)提供資料的蟲友10個(gè)金幣 |
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足下客(金幣+1): 謝謝你的參與 2011-04-06 13:41:04
1949stone(金幣+4): 鼓勵(lì) 2011-04-06 14:03:11
足下客(金幣+1): 2011-06-29 17:14:23
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1949stone(金幣+4): 鼓勵(lì) 2011-04-06 14:03:11
足下客(金幣+1): 2011-06-29 17:14:23
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1、分不同的組織加入不同的裂解液（不需要抽提RNA） 2、加入雜交探針過(guò)夜雜交（同一樣本多個(gè)基因檢測(cè)的探針在一起） 3、洗滌未雜交上的多余探針，放入信號(hào)放大探針雜交，洗滌，加入標(biāo)記探針雜交，洗滌，加入熒光染料，洗滌。 4、加入度數(shù)Buffer雜交5分鐘，上機(jī)讀數(shù)。 5、儀器自動(dòng)給出代表基因表達(dá)量倍比關(guān)系的熒光值結(jié)果。 |
2樓2011-04-06 12:53:59
3樓2011-04-06 13:39:31
★ ★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金幣+6): good 2011-04-06 15:04:10
足下客(金幣+5): 非常感謝，明白多了 2011-04-06 15:13:53
足下客(金幣+1): 2011-06-29 17:14:30
dhd997(金幣+6): good 2011-04-06 15:04:10
足下客(金幣+5): 非常感謝，明白多了 2011-04-06 15:13:53
足下客(金幣+1): 2011-06-29 17:14:30
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這個(gè)技術(shù)是和QPCR完全不同的原理的，也有內(nèi)參基因，說(shuō)明書上給出了很多個(gè)表達(dá)登記的內(nèi)參基因，如果要做絕對(duì)定量那肯定是要做標(biāo)曲的，但大家通常在做QPCR的時(shí)候做的是相對(duì)定量。這種技術(shù)是把不同基因的探針（包括看家基因的探針）放在一個(gè)樣本里來(lái)進(jìn)行雜交的。所以最后數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)的時(shí)候先把不同樣本之中的看家基因統(tǒng)一了，然后再在每一個(gè)樣本當(dāng)中不同基因和看家基因再計(jì)算一個(gè)相對(duì)表達(dá)量的值，所以不做標(biāo)曲就做的是相對(duì)定量。 做QPCR只有做病毒的是會(huì)做絕對(duì)定量的，其他做的基本都是相對(duì)定量。 |
4樓2011-04-06 14:12:15
5樓2011-04-12 10:51:25
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
足下客(金幣+2): 2011-07-01 11:19:05
西瓜(金幣+5, EPI+1): 很熱心，連之前一并獎(jiǎng)勵(lì)了 2011-07-01 12:42:18
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足下客(金幣+2): 2011-07-01 11:19:05
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如果選擇液相芯片的技術(shù)不需要取樣一致，多基因檢測(cè)的時(shí)候如果取樣不一致各個(gè)樣本中的看家基因也不一致了，可以通過(guò)調(diào)整看家基因來(lái)把樣本調(diào)整成一致的結(jié)果，所以沒(méi)有前期加樣時(shí)那么嚴(yán)格的一致要求，但RealTime就不行了。 呵呵，不知道我解釋清楚了沒(méi)。 |
6樓2011-07-01 09:49:35
7樓2011-07-15 09:33:23
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西瓜(金幣+1): 鼓勵(lì)交流 2011-07-15 23:31:36
西瓜(金幣+1): 鼓勵(lì)交流 2011-07-15 23:31:36
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不知道你們是用什么熒光編碼的，理論上熒光的激發(fā)和吸收波長(zhǎng)在儀器的范圍內(nèi)，都是可以測(cè)的。具體你應(yīng)該咨詢 一下Luminex公司或代理Luminex公司（如密理博）的技術(shù)支持人員。 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
gasolineoo8樓2011-07-15 12:47:06
9樓2011-07-16 09:26:45
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