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【分子生物】EPI帖 |
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1、分不同的組織加入不同的裂解液(不需要抽提RNA) 2、加入雜交探針過夜雜交(同一樣本多個基因檢測的探針在一起) 3、洗滌未雜交上的多余探針,放入信號放大探針雜交,洗滌,加入標記探針雜交,洗滌,加入熒光染料,洗滌。 4、加入度數(shù)Buffer雜交5分鐘,上機讀數(shù)。 5、儀器自動給出代表基因表達量倍比關(guān)系的熒光值結(jié)果。 |
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這個技術(shù)是和QPCR完全不同的原理的,也有內(nèi)參基因,說明書上給出了很多個表達登記的內(nèi)參基因,如果要做絕對定量那肯定是要做標曲的,但大家通常在做QPCR的時候做的是相對定量。這種技術(shù)是把不同基因的探針(包括看家基因的探針)放在一個樣本里來進行雜交的。所以最后數(shù)據(jù)統(tǒng)計的時候先把不同樣本之中的看家基因統(tǒng)一了,然后再在每一個樣本當中不同基因和看家基因再計算一個相對表達量的值,所以不做標曲就做的是相對定量。 做QPCR只有做病毒的是會做絕對定量的,其他做的基本都是相對定量。 |
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