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水水726新蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助】蛋白變性后為什么還要煮？？ 已有6人參與
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師姐的做法：蛋白加入loading buffer煮沸變性，放置-20保存，上樣前取出再煮沸2分鐘離心。 請(qǐng)問(wèn)為什么變性后的蛋白要再煮沸�。�？多煮次會(huì)對(duì)蛋白有影響么？不煮的話能直接上樣么？從-20取出需放置冰上化解么？？？ |
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小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
silicare(金幣+3, EPI+1): 經(jīng)驗(yàn)之談 2011-04-12 13:49:32
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silicare(金幣+3, EPI+1): 經(jīng)驗(yàn)之談 2011-04-12 13:49:32
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蛋白樣品加 loading buffer 煮3-5min， 最好立即就上樣。 如果不立即上樣，一定要-20℃以下立即保存，否則電泳出來(lái)的蛋白條帶就會(huì)變淺，變模糊。 樣品在-20攝氏度以下 拿出來(lái)的，室溫幾分鐘即化開(kāi)，混勻，立即上樣即可。 不用反復(fù)煮。 反復(fù)煮也會(huì)使得蛋白條帶變淺，變模糊。 我都是-20℃以細(xì)胞形式保存蛋白，經(jīng)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，這比加 loading buffer 煮的樣品保存效果更好。 總之，就是煮了就上樣最好！不上樣就不煮，直接冷凍保存。 |
6樓2011-04-12 13:08:52
7樓2015-03-25 10:15:13
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