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紫色云夢(mèng)新蟲 (初入文壇)
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[交流]
【求助/交流】基因克隆，誰能幫幫我。。。 已有8人參與
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| 最近被實(shí)驗(yàn)搞得頭都大了，導(dǎo)師讓做MHC基因克隆，現(xiàn)在還在中間目的片段的擴(kuò)增階段，設(shè)計(jì)了很多引物，中間只有偶爾一兩次擴(kuò)增出條帶，以后再也擴(kuò)增不出來，我都要瘋掉了。有沒有做克隆的大哥大姐，幫我分析一下原因到底可能出在哪里呢？還有我的分子基礎(chǔ)薄弱，關(guān)于克隆基因的一些好的建議希望大家不吝指教，拜謝了。 |
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空谷幽風(fēng)
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2樓2011-04-12 13:53:49
3樓2011-04-12 15:32:46
天使托
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1949stone(EPI+1): 鼓勵(lì) 2011-04-12 17:00:51
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其實(shí)對(duì)于你這個(gè)MHC基因克隆我不太懂。。。 不過要克隆一個(gè)基因首先要知道這個(gè)基因的全序列，然后找個(gè)軟件來設(shè)計(jì)引物（我們用英杰的NTI），設(shè)計(jì)引物我想你在板塊里可以找到很多帖子是關(guān)于如何設(shè)計(jì)引物的，這里就不贅述了；設(shè)計(jì)好引物之后交由公司合成，回來直接PCR，就OK了！ 不過PCR之前最好先根據(jù)引物合成報(bào)告單知道Tm值，P的時(shí)候設(shè)置一個(gè)溫度梯度，看看哪個(gè)溫度下P出來的條帶最亮。然后就選用那個(gè)溫度大批量進(jìn)行擴(kuò)增。。。。 不知道你清楚我說的嘛？ 如果哪里不懂PM我！ |
4樓2011-04-12 16:49:51
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小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
1949stone(金幣+1): 鼓勵(lì) 2011-04-12 17:01:45
小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
1949stone(金幣+1): 鼓勵(lì) 2011-04-12 17:01:45
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本帖內(nèi)容被屏蔽 |
5樓2011-04-12 16:56:59
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6樓2011-04-13 09:58:50
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