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[交流]
【求助/交流】基因克隆，誰能幫幫我。。。 已有8人參與
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| 最近被實(shí)驗(yàn)搞得頭都大了，導(dǎo)師讓做MHC基因克隆，現(xiàn)在還在中間目的片段的擴(kuò)增階段，設(shè)計(jì)了很多引物，中間只有偶爾一兩次擴(kuò)增出條帶，以后再也擴(kuò)增不出來，我都要瘋掉了。有沒有做克隆的大哥大姐，幫我分析一下原因到底可能出在哪里呢？還有我的分子基礎(chǔ)薄弱，關(guān)于克隆基因的一些好的建議希望大家不吝指教，拜謝了。 |
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7樓2011-04-13 13:26:18
空谷幽風(fēng)
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2樓2011-04-12 13:53:49
3樓2011-04-12 15:32:46
天使托
專家顧問 (職業(yè)作家)
T.Shen
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- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
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1949stone(EPI+1): 鼓勵 2011-04-12 17:00:51
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其實(shí)對于你這個MHC基因克隆我不太懂。。。 不過要克隆一個基因首先要知道這個基因的全序列，然后找個軟件來設(shè)計(jì)引物（我們用英杰的NTI），設(shè)計(jì)引物我想你在板塊里可以找到很多帖子是關(guān)于如何設(shè)計(jì)引物的，這里就不贅述了；設(shè)計(jì)好引物之后交由公司合成，回來直接PCR，就OK了！ 不過PCR之前最好先根據(jù)引物合成報告單知道Tm值，P的時候設(shè)置一個溫度梯度，看看哪個溫度下P出來的條帶最亮。然后就選用那個溫度大批量進(jìn)行擴(kuò)增。。。。 不知道你清楚我說的嘛？ 如果哪里不懂PM我！ |
4樓2011-04-12 16:49:51
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