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【求助】石蠟組織標本中提取DNA方法
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最近按照試劑盒中步驟提取石蠟組織中的DNA,但一直提不出。覺得問題應該出在脫蠟步驟上。 請問大蝦們,用二甲苯脫蠟應該注意什么?如何判斷石蠟已經脫干凈,可以進行無水乙醇洗滌了?乙醇洗滌后時候可以直接消化?還是在消化前需要其他步驟? 關鍵時刻請拉戰(zhàn)友一把,感激不盡! |
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呃...LZ你做的是石蠟塊,還是石蠟切片提取DNA? 有條件的話,我建議做成10~15um的石蠟切片后再提取,這樣效果較好。如果是石蠟塊且形狀較大,那么脫蠟時間要相應延長,最好能夠50℃溫育半小時左右。 至于如何判斷石蠟是否已經除凈...這個,我沒什么好辦法,就是肉眼觀察。不過我通常是用二甲苯重復處理兩次,之后再用乙醇清洗。 乙醇清洗完之后自然干燥,如果是切片的話就可以直接裂解液消化了,如果是較大的組織塊,需要加入裂解液后用勻漿器打碎,之后再恒溫孵育若干時間。 最后提一點,二甲苯有毒,如果需要經常提取的話,建議用右旋檸檬烯(D-limonene)代替,效果很好,氣味芳香,無毒無害~ ![]() [ Last edited by holyala on 2011-4-15 at 10:07 ] |
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