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yuezhixian

版主

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[交流] 【求助】石蠟組織標(biāo)本中提取DNA方法

最近按照試劑盒中步驟提取石蠟組織中的DNA，但一直提不出。覺(jué)得問(wèn)題應(yīng)該出在脫蠟步驟上。
請(qǐng)問(wèn)大蝦們，用二甲苯脫蠟應(yīng)該注意什么？如何判斷石蠟已經(jīng)脫干凈，可以進(jìn)行無(wú)水乙醇洗滌了？乙醇洗滌后時(shí)候可以直接消化？還是在消化前需要其他步驟？

關(guān)鍵時(shí)刻請(qǐng)拉戰(zhàn)友一把，感激不盡！

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1樓 2011-04-14 23:19:48

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yangsener032

主管區(qū)長(zhǎng)

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小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
lstt09nk(金幣+2): 感謝參與 2011-05-14 09:30:37

額。。。。。。
石蠟組織中的組織塊是經(jīng)過(guò)甲醛浸泡處理過(guò)的吧？貌似甲醛會(huì)破壞DNA，所以少有提得出來(lái)的呢。我有一個(gè)同學(xué)做的就是這個(gè)相關(guān)的。不過(guò)我不是很清楚這些之間有沒(méi)有必然的聯(lián)系。

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3樓2011-04-17 09:29:17

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holyala

超級(jí)版主

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yuezhixian(金幣+5): 灰常感謝！ 2011-04-15 17:10:26
lstt09nk(金幣+6): 辛苦 2011-05-14 09:28:53

呃...LZ你做的是石蠟塊，還是石蠟切片提取DNA？
有條件的話，我建議做成10~15um的石蠟切片后再提取，這樣效果較好。如果是石蠟塊且形狀較大，那么脫蠟時(shí)間要相應(yīng)延長(zhǎng)，最好能夠50℃溫育半小時(shí)左右。
至于如何判斷石蠟是否已經(jīng)除凈...這個(gè)，我沒(méi)什么好辦法，就是肉眼觀察。不過(guò)我通常是用二甲苯重復(fù)處理兩次，之后再用乙醇清洗。
乙醇清洗完之后自然干燥，如果是切片的話就可以直接裂解液消化了，如果是較大的組織塊，需要加入裂解液后用勻漿器打碎，之后再恒溫孵育若干時(shí)間。
最后提一點(diǎn)，二甲苯有毒，如果需要經(jīng)常提取的話，建議用右旋檸檬烯（D-limonene）代替，效果很好，氣味芳香，無(wú)毒無(wú)害~

[ Last edited by holyala on 2011-4-15 at 10:07 ]

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2樓2011-04-15 10:04:34

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skywalkerelf

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小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖

Qiagen有一款試劑盒可以提取蠟塊組織的DNA，試試吧，我們這有人用！還不錯(cuò)的說(shuō)哦！

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4樓2011-05-13 14:52:25

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Explor

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小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖

BIOG石蠟包埋組織DNA抽提試劑盒無(wú)需過(guò)夜溫育即可從福爾馬林固定的、石蠟包埋組織中高效純化基因組DNA，可以一試。

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5樓2019-12-06 10:48:21

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