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qPCR標(biāo)準(zhǔn)曲線制作
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| 想對(duì)某物種某基因的表達(dá)做相對(duì)定量，想用雙標(biāo)曲線法，請(qǐng)問(wèn)這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線如何去做？是要提取某物種RNA反轉(zhuǎn)得到cDNA后測(cè)定cDNA濃度再做不同梯度稀釋么？我實(shí)驗(yàn)室剛開始做這個(gè)，很多事情都不清楚。謝謝各位了！ |
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12zhangwei
新蟲 (小有名氣)
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西瓜(金幣+3): 感謝分享哦 2011-07-23 16:58:01
西瓜(金幣+3): 感謝分享哦 2011-07-23 16:58:01
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你好我也要做這個(gè)，也是不懂，現(xiàn)在還在理論學(xué)習(xí)，不過(guò)我找到一點(diǎn)資料，可以和你分享一下，希望對(duì)你有幫助。應(yīng)用Real Time PCR進(jìn)行mRNA表達(dá)量的相對(duì)定量分析 http://www.doc88.com/p-73342721466.html |
2樓2011-07-22 21:06:28
空谷幽風(fēng)
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【答案】應(yīng)助回帖
★
西瓜(金幣+1): 其實(shí)就是說(shuō)標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品用的是同一對(duì)引物吧。有很多實(shí)驗(yàn)只能用絕對(duì)定量呢，比如說(shuō)需要知道確切的分子數(shù)目。單看表達(dá)量變化的話用相對(duì)定量就ok了。 2011-07-23 17:00:09
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西瓜(金幣+1): 其實(shí)就是說(shuō)標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品用的是同一對(duì)引物吧。有很多實(shí)驗(yàn)只能用絕對(duì)定量呢，比如說(shuō)需要知道確切的分子數(shù)目。單看表達(dá)量變化的話用相對(duì)定量就ok了。 2011-07-23 17:00:09
7788945(金幣+1): 2011-08-03 15:36:45
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| 做標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)曲線的模板與你要定量的模板必須是擴(kuò)的完全相同的一段序列，并且你做標(biāo)準(zhǔn)曲線的模板必須能夠精確定量，比如幾個(gè)拷貝數(shù)要能算出來(lái)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的制備是比較難的一件事情，一般都是做相對(duì)定量而不會(huì)做絕對(duì)定量 |
3樓2011-07-22 21:16:45
豬小樂(lè)呀
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4樓2016-11-25 16:39:07
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