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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » qPCR標準曲線制作
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[求助]
qPCR標準曲線制作
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| 想對某物種某基因的表達做相對定量，想用雙標曲線法，請問這個標準曲線如何去做？是要提取某物種RNA反轉得到cDNA后測定cDNA濃度再做不同梯度稀釋么？我實驗室剛開始做這個，很多事情都不清楚。謝謝各位了！ |
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空谷幽風
金蟲 (正式寫手)
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- 專業(yè): 生物大分子結構與功能
【答案】應助回帖
★
西瓜(金幣+1): 其實就是說標準曲線和樣品用的是同一對引物吧。有很多實驗只能用絕對定量呢，比如說需要知道確切的分子數(shù)目。單看表達量變化的話用相對定量就ok了。 2011-07-23 17:00:09
7788945(金幣+1): 2011-08-03 15:36:45
7788945(金幣+3): 2011-08-05 09:27:09
7788945(金幣+3): 2011-08-19 20:10:54
西瓜(金幣+1): 其實就是說標準曲線和樣品用的是同一對引物吧。有很多實驗只能用絕對定量呢，比如說需要知道確切的分子數(shù)目。單看表達量變化的話用相對定量就ok了。 2011-07-23 17:00:09
7788945(金幣+1): 2011-08-03 15:36:45
7788945(金幣+3): 2011-08-05 09:27:09
7788945(金幣+3): 2011-08-19 20:10:54
| 做標準標準曲線的模板與你要定量的模板必須是擴的完全相同的一段序列，并且你做標準曲線的模板必須能夠精確定量，比如幾個拷貝數(shù)要能算出來，所以標準品的制備是比較難的一件事情，一般都是做相對定量而不會做絕對定量 |
3樓2011-07-22 21:16:45
12zhangwei
新蟲 (小有名氣)
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- 專業(yè): 生物化學
★ ★ ★
西瓜(金幣+3): 感謝分享哦 2011-07-23 16:58:01
西瓜(金幣+3): 感謝分享哦 2011-07-23 16:58:01
|
你好我也要做這個，也是不懂，現(xiàn)在還在理論學習，不過我找到一點資料，可以和你分享一下，希望對你有幫助。應用Real Time PCR進行mRNA表達量的相對定量分析 http://www.doc88.com/p-73342721466.html |
2樓2011-07-22 21:06:28
4樓2016-11-25 16:39:07
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