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caojinxuan銀蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[求助]
有關(guān)引物設(shè)計(jì)問(wèn)題
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大家好，本人是新手，想請(qǐng)教有關(guān)引物設(shè)計(jì)問(wèn)題，一下是要擴(kuò)增的目的基因序列： 1 atggcacaag tcattaatac aaacagcctg tcgctgttga cccagaataa cctgaacaaa 61 tcccagtccg ctctgggcac cgctatcgag cgtctgtctt ccggtctgcg tatcaacagc 121 gcgaaagacg atgcggcagg tcaggcgatt gctaaccgtt ttaccgcgaa catcaaaggt 181 ctgactcagg cttcccgtaa cgctaacgac ggtatctcca ttgcgcagac cactgaaggc 241 gcgctgaacg aaatcaacaa caacctgcag cgtgtgcgtg aactggcggt tcagtctgct 301 aacagcacca actcccagtc tgacctcgac tccatccagg ctgaaatcac ccagcgcctg 361 aacgaaatcg accgtgtatc cggccagact cagttcaacg gcgtgaaagt cctggcgcag 421 gacaacaccc tgaccatcca ggttggtgcc aacgacggtg aaactatcga tatcgatctg 481 aagcagatca actctcagac cctgggtctg gatacgctga atgtgcaaca aaaatataag 541 gtcagcgata cggctgcaac tgttacagga tatgccgata ctacgattgc tttagacaat 601 agtactttta aagcctcggc tactggtctt ggtggtactg accagaaaat tgatggcgat 661 ttaaaatttg atgatacgac tggaaaatat tacgccaaag ttaccgttac ggggggaact 721 ggtaaagatg gctattatga agtttccgtt gataagacga acggtaaggt gactcttgct 781 ggcggtgcga cttccccgct tacaggtgga ctacctgcga cagcaactga ggatgtgaaa 841 aatgtacaag ttgcaaatgc tgatttgaca gaggctaaag ccgcattgac agcagcaggt 901 gttaccggca cagcatctgt tgttaagatg tcttatactg ataataacgg taaaactatt 961 gatggtggtt tagcagttaa ggtaggcgat gattactatt ctgcaactca aaataaagat 1021 ggttccataa gtattaatac tacgaaatac actgcagatg acggtacatc caaaactgca 1081 ctaaacaaac tgggtggcgc agacggcaaa accgaagttg tttctattgg tggtaaaact 1141 tacgctgcaa gtaaagccga aggtcacaac tttaaagcac agcctgatct ggcggaagcg 1201 gctgctacaa ccaccgaaaa cccgctgcag aaaattgatg ctgctttggc acaggttgac 1261 acgttacgtt ctgacctggg tgcggtacag aaccgtttca actccgctat taccaacctg 1321 ggcaacaccg taaacaacct gacttctgcc cgtagccgta tcgaagattc cgactacgcg 1381 accgaagttt ccaacatgtc tcgcgcgcag attctgcagc aggccggtac ctccgttctg 1441 gcgcaggcga accaggttcc gcaaaacgtc ctctctttac tgcgttaa FLICF: 5`-gggaattc CATATG gcacaag tcattaatac-3` FLICR: 5`-ccgCTCGAG ttaacccagtaaagagaggacgt-3` 這是我設(shè)計(jì)的引物，不知道可行不可行 |
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xiaoweiwei121
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4樓2011-04-30 06:02:38
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5樓2011-04-30 11:33:00
caojinxuan
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6樓2011-05-03 22:17:26
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7樓2011-05-03 22:18:24
xiaoweiwei121
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【答案】應(yīng)助回帖
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西瓜(金幣+5, EPI+1): 辛苦了！ 2011-05-04 00:47:56
西瓜(金幣+5, EPI+1): 辛苦了！ 2011-05-04 00:47:56
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這是不是你的載體序列 ？如果不是，請(qǐng)?zhí)峁┮幌履愕膬蓚�(gè)酶切之間的序列，及讀碼 我在網(wǎng)上搜的，如果不對(duì)的話，你提供一下 圖譜 序列 NdeI Type II restriction enzyme 5' CA^TATG 3' NcoI Type II restriction enzyme 5' C^CATGG 3' NdeI 和NcoI 之間的序列， C ATA TGG CTG CCG CGCGGCACCAGGCCGCTGCTGTGATGATGATGATGATGGCTGCTGCCCATGGTATATCTCCTTCTTAAAGTTAAACAAAATTATTTCTAGAGGGGAATTGTTATCCGCTCACAATTCCCCTATAGTGAGTCGTATTAATTTCGCGGGATCGAGATC 如果我現(xiàn)在給出的兩個(gè)酶之間的序列是對(duì)的，那你的引物不僅退火溫度相差大， 而且讀碼框也改變了，所以你自己多看書(shū)，好好琢磨一下吧 這是第一步，如果這里弄不好，下邊做再多也沒(méi)用 ps：偶是新手，如有不當(dāng)之處，歡迎討論 |
8樓2011-05-03 23:27:15
caojinxuan
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9樓2011-05-04 09:15:25
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