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wyhwawj_87新蟲(chóng) (初入文壇)
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[交流]
求助 原核表達(dá)WB 多條帶 已有5人參與
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我用的是PET-28，在BL21中的表達(dá)，IPTG 0.5mM 誘導(dǎo)4h，菌體制樣SDS-PAGE和WB,page膠考染沒(méi)有差異條帶，WB檢測(cè)時(shí)卻有多條帶，并且比預(yù)計(jì)大（20kd》10kd） 我換過(guò)載體和表達(dá)菌株都出現(xiàn)了這個(gè)問(wèn)題��！請(qǐng)問(wèn)大俠們是什么問(wèn)題�。浚浚。�！ 自己分析：我的片段含有多對(duì)二硫鍵，80個(gè)aa中含有24個(gè)CYS ,是否可能是二硫鍵太多形成了多聚體，多聚體之間又因?yàn)槎蜴I的斷裂而形成大小不一的單體？？？ |
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lstt09nk
鐵桿木蟲(chóng) (職業(yè)作家)
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小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
西瓜(金幣+4): 鼓勵(lì)交流 2011-05-04 00:48:23
小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
西瓜(金幣+4): 鼓勵(lì)交流 2011-05-04 00:48:23
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你確定你的載體，你的序列沒(méi)問(wèn)題嗎？ 你的載體上沒(méi)有連接了除了你的目的基因外的其他片段嗎？ 我們實(shí)驗(yàn)室曾出過(guò)這樣的問(wèn)題，自己的載體上海連接了其他的片段，結(jié)果表達(dá)出來(lái)的東西肯定是要大的啊，這種細(xì)節(jié)的東西千萬(wàn)不能忽略~~ 基因上沒(méi)問(wèn)題，再來(lái)考慮表達(dá)和操作的問(wèn)題 你的抗體是單克隆抗體嗎？ |
5樓2011-05-03 23:19:50
xuguanghai
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2樓2011-05-03 14:48:18
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3樓2011-05-03 15:12:41
4樓2011-05-03 20:48:25
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