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yujijiang銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
DGGE上樣孔很亮，DNA跑不下來
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最近在做氨氧化細菌的生物多樣性，我擴增了amoA的基因特異性很好，條帶單一，但是做DGGE時好多跑不出孔，已經(jīng)嘗試了很多次，情況依舊。請各位大蝦給小弟指點迷津。。。萬分感謝！ DGGE的條件：6%的膠，變性梯度是30-60%，沒有堆積膠，上樣前PCR產(chǎn)物為純化，上樣前會將孔沖洗一下，電泳時間90V，13h。 我灌膠是做的0%和100%的母液，灌膠時高低濃度為14毫升，加入100微升APS和9微升的TEMED。 |
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ureyguo
木蟲 (正式寫手)
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- 專業(yè): 海洋環(huán)境科學
9樓2011-05-06 17:31:10
【答案】應助回帖
★ ★ ★
lstt09nk(金幣+3): 感謝交流，歡迎常來 2011-05-05 18:22:07
lstt09nk(金幣+3): 感謝交流，歡迎常來 2011-05-05 18:22:07
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我做過Archaea 的amoA基因的DGGE，效果很好。 細菌的amoA基因的DGGE沒做過。呵呵。 Archaeal amoA genes were amplified using primers CrenamoA-23f and CrenamoA-616r without the requirement of a GC clamp. Archaeal amoA gene DGGE protocol: 0.75-mm-thick 8% (w/v) polyacrylamide gels, 15% to 60%,Gels were electrophoresed in 1 × TAE buffer at 60 °C for 14 h at 90 V. 樓主可以將你的引物序列，名稱，PCR程序貼出來看看 |
2樓2011-05-05 12:26:30
3樓2011-05-05 13:00:00
yujijiang
銅蟲 (初入文壇)
- 應助: 0 (幼兒園)
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- 帖子: 32
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- 蟲號: 1188048
- 注冊: 2011-01-12
- 專業(yè): 微生物生態(tài)學
4樓2011-05-05 13:34:01
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