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swallow52u銀蟲 (正式寫手)
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[求助]
PCR的電泳結(jié)果是除了Marker能出來(lái)?xiàng)l帶，其他都是什么都沒(méi)有
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我是做的RT-PCR做的細(xì)胞的，在提取完RNA后我做了電泳和濃度測(cè)定，結(jié)果都還不錯(cuò)。也順利的反轉(zhuǎn)錄成了CDNA，在做β-actin的PCR時(shí)，結(jié)果很好，條帶也比較清楚。我還做了兩遍，先是做了正常對(duì)照組的，接著跑了所有樣本的β-actin，所有樣都出來(lái)了，但我現(xiàn)在已經(jīng)重復(fù)不出來(lái)了，條件設(shè)置的都一樣！我也思考了下原因，可能是CDNA降解了？或者是引物污染了？我只能想到這么多��？請(qǐng)各位高手幫幫我啊，我的實(shí)驗(yàn)該怎樣改進(jìn)？謝謝了？現(xiàn)在的PCR的電泳結(jié)果是除了Marker能出來(lái)?xiàng)l帶，其他都是什么都沒(méi)有。愁死我了��！ 我的PCR體系是 PCR步驟: 20ul體系 MIX 10uL cDNA 1 uL 引物上游 1 uL， 引物下游 1 uL DEPC H2O 補(bǔ)足20ul 加樣的順序也是這樣的，不知道合適不？ PCR上機(jī)設(shè)置溫度: 處理 溫度 時(shí)間 預(yù)變性 94℃ 5min 變性 94℃ 30s 退火 根據(jù)說(shuō)明上下浮動(dòng)2℃ 45s 延伸 72℃ 30s 循環(huán) 35 從第2個(gè)開始 45s/個(gè) 延伸 72 7min 4℃ Forever [ Last edited by 1949stone on 2011-5-20 at 17:59 ] |
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路人甲007
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3樓2011-05-20 10:04:07
swallow52u
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dhd997(金幣+5, EPI+1): good 2011-05-20 08:29:27
dhd997(EPI-1): 暫時(shí)撤回。確實(shí)有用在補(bǔ)加 2011-05-20 11:03:08
dhd997(金幣+5, EPI+1): good 2011-05-20 08:29:27
dhd997(EPI-1): 暫時(shí)撤回。確實(shí)有用在補(bǔ)加 2011-05-20 11:03:08
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我的PCR體系是 PCR步驟: 20ul體系 MIX 10uL cDNA 1 uL 引物上游 1 uL， 引物下游 1 uL DEPC H2O 補(bǔ)足20ul 加樣的順序也是這樣的，不知道合適不？ PCR上機(jī)設(shè)置溫度: 處理 溫度 時(shí)間 預(yù)變性 94℃ 5min 變性 94℃ 30s 退火 根據(jù)說(shuō)明上下浮動(dòng)2℃ 45s 延伸 72℃ 30s 循環(huán) 35 從第2個(gè)開始 45s/個(gè) 延伸 72 7min 4℃ Forever |
2樓2011-05-20 01:55:39
zhaohq1209
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4樓2011-05-20 10:08:54
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5樓2011-05-20 10:52:45
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