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激光掃描共聚焦顯微技術(shù)：原理；標本制備和圖像采集；應用，方面的論文
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3樓2011-05-30 18:41:56
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激光共聚焦顯微鏡的主要原理是利用激光掃描束通過光柵針孔形成點光源，在熒光標記標本的焦平面上逐點掃描，采集點的光信號通過探測針孔到達光電倍增管（PMT），再經(jīng)過信號處理，在計算機監(jiān)視屏上形成圖像。由于激光光源的光柵針孔和探測針孔對物鏡焦平面是共軛的，焦平面上的點同時聚焦于光柵針孔和探測針孔，進行點掃描時，掃描點以外的點不會成像，經(jīng)逐點掃描后才形成整個標本的光學切片（Optic section）。 主要生物學應用 1、組織和細胞中熒光標記的分子和結(jié)構(gòu)的檢測 標本制備方法主要有免疫熒光組織和細胞化學法、熒光蛋白標記分子法、熒光細胞染料標記法等。 2、定量或半定量測量Ca2+ 和pH等細胞內(nèi)離子濃度及變化 利用Fluo23 、Fura2等熒光探針可以測量Ca2+在活細胞內(nèi)的濃度及變化。 3、熒光光漂白及恢復技術(shù) 利用高能量激光束將細胞內(nèi)某一部分中選定靶區(qū)域的某種熒光淬滅，然后觀察鄰近相同的熒光標記物重新擴散入該區(qū)域的速度和方式，從而分析細胞內(nèi)蛋白質(zhì)運輸、受體在細胞膜上的流動和大分子組裝等細胞生物學過程。 4、長時程觀察細胞遷移和生長 可以用于數(shù)小時的長時程定時掃描，記錄細胞遷移和生長等細胞生物學現(xiàn)象。 5、其他的生物學應用 用高能量激光束進行細胞損傷和損毀實驗，一般要用紫外激光束進行細胞損毀；細胞間通訊研究；光解籠鎖活化技術(shù)等。 |
2樓2011-05-30 12:07:39
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