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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 微生物 » 實驗/技術 » 請教芽孢桿菌的染色方法
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[交流]
請教芽孢桿菌的染色方法
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| 如題，請教高手有關芽孢桿菌的染色方法，如選用的染色試劑（含濃度）種類，使用先后順序及有關的注意事項等。本人是跨專業(yè)背景，請微生物專業(yè)的高人指點一下哈，謝過謝過！ |
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shangyufang(金幣+1):謝謝參與
shangyufang(金幣+1): 非常感謝詳細的解答。今天就參照此法來試一下。 2011-06-02 09:47:47
shangyufang(金幣+1):謝謝參與
shangyufang(金幣+1): 非常感謝詳細的解答。今天就參照此法來試一下。 2011-06-02 09:47:47
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上面的革蘭氏染色主要是針對細胞體的，要想看到芽孢必需得芽孢染色以下為兩種方法： 方法1、 �。�1）將培養(yǎng)24小時左右的枯草芽孢桿菌或其他芽孢桿菌，作涂片、干燥、固定。 �。�2）滴加3—5滴孔雀綠染液于已固定的涂片上。 （3）用木夾夾住載玻片在火焰上加熱，使染液冒蒸汽但勿沸騰，切忌使染液蒸干，必要時可添加少許染液。加熱時間從染液冒蒸汽時開始計算約4—5分鐘。這一步也可不加熱，改用飽和的孔雀綠水溶液（約7．6％）染10分鐘。 �。�4）傾去染液，待玻片冷卻后水洗至孔雀綠不再褪色為止。 �。�5）用番紅水溶液復染1分鐘，水洗至水為無色。 （6）待干燥后，置油鏡觀察，芽孢呈綠色，菌體呈紅色。 注意 �。�1）選用適當菌齡的菌種，幼齡菌尚未形成芽孢，而老齡菌芽孢囊已經破裂。 （2）加熱染色時必須維持在染液冒蒸汽的狀態(tài)，加熱沸騰會導致菌體或芽孢囊破裂，加熱不夠則芽孢難以著色。 方法2、 �。�1）取二支潔凈的小試管，分別加入0．2ml無菌水，再往一管中加入1—2接種環(huán)的蠟狀芽孢桿菌的菌苔，另一管中加入1—2接種環(huán)的生孢梭菌的菌苔，兩管各自充分混合成濃厚的菌懸液。 �。�2）在菌懸液中分別加入0．2ml苯酚品紅溶液，充分混合后，于沸水浴中加熱3—5分鐘。 （3）用接種環(huán)分別取上述混合液2—3環(huán)于兩片載玻片上，涂薄，風干后，將載玻片稍傾斜于燒杯上，用95％乙醇沖洗至無紅色液流出。 �。�4）再用自來水沖洗，濾紙吸干。 （5）取1—2接種環(huán)黑色素溶液于涂片處，立即展開涂薄，自然干燥后，油鏡觀察，在淡紫灰色背景的襯托下，菌體為白色，菌體內的芽孢為紅色。 |
3樓2011-06-01 21:31:48
2樓2011-06-01 19:55:51
4樓2011-06-02 08:18:50
5樓2011-06-02 14:54:42
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