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[交流]
請(qǐng)教芽孢桿菌的染色方法
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| 如題，請(qǐng)教高手有關(guān)芽孢桿菌的染色方法，如選用的染色試劑（含濃度）種類，使用先后順序及有關(guān)的注意事項(xiàng)等。本人是跨專業(yè)背景，請(qǐng)微生物專業(yè)的高人指點(diǎn)一下哈，謝過謝過！ |
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4樓2011-06-02 08:18:50
★ ★ ★ ★
shangyufang(金幣+1):謝謝參與
amisking(金幣+3): 鼓勵(lì)應(yīng)助 2011-06-01 21:00:12
shangyufang(金幣+1):謝謝參與
amisking(金幣+3): 鼓勵(lì)應(yīng)助 2011-06-01 21:00:12
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最常用的革蘭氏染色法。芽孢桿菌屬于革蘭氏陽性菌。 革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復(fù)染等四個(gè)步驟，具體操作方法是： 1）涂片固定。 2）草酸銨結(jié)晶紫染1分鐘。 3）自來水沖洗。 4）加碘液覆蓋涂面染約1分鐘。 5）水洗，用吸水紙吸去水分。 6）加95%酒精數(shù)滴，并輕輕搖動(dòng)進(jìn)行脫色，20秒后水洗，吸去水分。 7）蕃紅染色液（�。┤�2分鐘后，自來水沖洗。干燥，鏡檢。 希望對(duì)你有參考價(jià)值 |
2樓2011-06-01 19:55:51
★
shangyufang(金幣+1):謝謝參與
shangyufang(金幣+1): 非常感謝詳細(xì)的解答。今天就參照此法來試一下。 2011-06-02 09:47:47
shangyufang(金幣+1):謝謝參與
shangyufang(金幣+1): 非常感謝詳細(xì)的解答。今天就參照此法來試一下。 2011-06-02 09:47:47
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上面的革蘭氏染色主要是針對(duì)細(xì)胞體的，要想看到芽孢必需得芽孢染色以下為兩種方法： 方法1、 �。�1）將培養(yǎng)24小時(shí)左右的枯草芽孢桿菌或其他芽孢桿菌，作涂片、干燥、固定。 �。�2）滴加3—5滴孔雀綠染液于已固定的涂片上。 �。�3）用木夾夾住載玻片在火焰上加熱，使染液冒蒸汽但勿沸騰，切忌使染液蒸干，必要時(shí)可添加少許染液。加熱時(shí)間從染液冒蒸汽時(shí)開始計(jì)算約4—5分鐘。這一步也可不加熱，改用飽和的孔雀綠水溶液（約7．6％）染10分鐘。 �。�4）傾去染液，待玻片冷卻后水洗至孔雀綠不再褪色為止。 �。�5）用番紅水溶液復(fù)染1分鐘，水洗至水為無色。 �。�6）待干燥后，置油鏡觀察，芽孢呈綠色，菌體呈紅色。 注意 （1）選用適當(dāng)菌齡的菌種，幼齡菌尚未形成芽孢，而老齡菌芽孢囊已經(jīng)破裂。 （2）加熱染色時(shí)必須維持在染液冒蒸汽的狀態(tài)，加熱沸騰會(huì)導(dǎo)致菌體或芽孢囊破裂，加熱不夠則芽孢難以著色。 方法2、 �。�1）取二支潔凈的小試管，分別加入0．2ml無菌水，再往一管中加入1—2接種環(huán)的蠟狀芽孢桿菌的菌苔，另一管中加入1—2接種環(huán)的生孢梭菌的菌苔，兩管各自充分混合成濃厚的菌懸液。 �。�2）在菌懸液中分別加入0．2ml苯酚品紅溶液，充分混合后，于沸水浴中加熱3—5分鐘。 �。�3）用接種環(huán)分別取上述混合液2—3環(huán)于兩片載玻片上，涂薄，風(fēng)干后，將載玻片稍傾斜于燒杯上，用95％乙醇沖洗至無紅色液流出。 �。�4）再用自來水沖洗，濾紙吸干。 （5）取1—2接種環(huán)黑色素溶液于涂片處，立即展開涂薄，自然干燥后，油鏡觀察，在淡紫灰色背景的襯托下，菌體為白色，菌體內(nèi)的芽孢為紅色。 |
3樓2011-06-01 21:31:48
5樓2011-06-02 14:54:42
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