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丫頭7976版主
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[求助]
關于在表達蛋白和GFP蛋白之間的linker
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| 各位好，我最近在做膜蛋白的表達，在構建載體的時候我在膜蛋白的C端還加了GFP指示蛋白，但是在誘導表達后，根本看不到菌發(fā)出綠色熒光，而我只表達GFP時卻能看到菌是綠色的，我在構建載體的時把膜蛋白和GFP直接連在一起了，中間沒有加linker regions，我想問一下各位，我的菌株看不出綠色的原因是不是我沒有加一個linker的原因呢，如果有做過這方面的大俠是不是可以知道一下我呢，多謝各位！ |
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【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★
丫頭7976(金幣+3): Thank you for your advices，but 2011-06-06 17:42:47
dhd997(金幣+5): good 2011-06-06 21:28:13
丫頭7976(金幣+3): Thank you for your advices，but 2011-06-06 17:42:47
dhd997(金幣+5): good 2011-06-06 21:28:13
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protein of interest surely weakens fluorescence of GFP with linker or without linker. i have ever made experiment about expression of fusion protein including GFP, the fusion protein including GFP can emit green fluorescence although its green fluorescence is weaker than that of control. but the fusion protein in my experiment is located at the cytoplasm, and your protein occured in the membrane, I don`t know whether location of protein including GFP effects fluorescence emission or not. |
2樓2011-06-06 11:13:02
丫頭7976
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4樓2011-06-06 17:59:40
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【答案】應助回帖
★ ★
丫頭7976(金幣+2): thanks 2011-06-07 16:09:05
dhd997(金幣+2): 還拽上了 2011-06-07 16:51:12
丫頭7976(金幣+2): thanks 2011-06-07 16:09:05
dhd997(金幣+2): 還拽上了 2011-06-07 16:51:12
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You can't see the fluorescence if the GFP is not excitated. But, if your fusion protein is well expressed, you can see that the bacteria expressing the fusion protein is green, without excitation of GFP. If you purify the fusion protein, the solution containing the protein is also green, very lovely  I've seen those with my own eyes. So, trust me  [ Last edited by 西瓜 on 2011-6-6 at 22:48 ] |
5樓2011-06-06 22:35:00
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