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AlbaRosea金蟲 (初入文壇)
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[求助]
PCAMBIA1300系列載體表達(dá)初始ATG
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各位大俠、 請問一下就是pCAMBIA1301,1304等幾個載體里邊。順時針的35s啟動子下游，是從哪里的ATG開始讀的呀？如果用ncoI 和bgl II 是不是都是從NCO I 的ATG開始讀的呀？那么如果用這兩個酶切位點(diǎn)，是不是都要在目標(biāo)序列里補(bǔ)上兩個堿基啊才能保證不會移碼��？（ 1 catggtagat ctgactagta aaggagaaga，摘自http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/AF234298） 生物基礎(chǔ)薄弱啊。忘高人指點(diǎn)一下啊。謝謝。 |
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4樓2013-07-12 23:05:48
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5樓2013-07-13 08:55:30
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【答案】應(yīng)助回帖
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AlbaRosea: 金幣+10, ★★★★★最佳答案, 謝謝。。太謝謝了。。 2013-07-13 16:12:49
AlbaRosea: 金幣+10, ★★★★★最佳答案, 謝謝。。太謝謝了。。 2013-07-13 16:12:49
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linker有很多種，就是短小的序列不形成高級折疊，使融合蛋分別獨(dú)立折疊。常用的有甘氨酸linker。構(gòu)建載體的時候往往在插入的位點(diǎn)與要融合的標(biāo)簽直接有一些堿基，所以通常情況下不做任何處理也往往可以成功表達(dá)出融合蛋白。我只是提醒一下而已。 目的基因前面加兩個堿基一般是比較隨意的，只要不形成終止子或者Pro這種對蛋白折疊構(gòu)象發(fā)生較大影響的氨基酸就可以了。表達(dá)出來的蛋白比原來的目標(biāo)蛋白多兩個氨基酸，你的ATG可以保留。多兩個氨基酸一般不會對蛋白的結(jié)構(gòu)和功能造成什么影響。 |
6樓2013-07-13 09:18:19
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