 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2353 | 回復(fù): 10 | ||
| 本帖產(chǎn)生 1 個 BioEPI ，點(diǎn)擊這里進(jìn)行查看 | ||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
mmojf新蟲 (初入文壇)
|
[求助]
關(guān)于RNA以及cDNA電泳問題，拜求各位大俠指點(diǎn)
|
|
|
蝦米我實(shí)驗(yàn)的目的是先提取RNA，然后將其反轉(zhuǎn)錄成cDNA，以cDNA為模板，進(jìn)行 PCR以獲取目的片段。實(shí)驗(yàn)材料為細(xì)菌，提取RNA 后進(jìn)行紫外分光進(jìn)行檢測濃度， 濃度比較高，260與280的OD比值也符合實(shí)驗(yàn)要求。但是反轉(zhuǎn)錄后進(jìn)行PCR無條 帶，高手指點(diǎn)后對RNA進(jìn)行電泳，電泳無條帶，同時Marker有條帶，證明是可能是 RNA問題，個人總結(jié)認(rèn)為是RNA發(fā)生降解，但不知道其降解過程發(fā)生在電泳過程中 還是保存過程中，提RNA完全按照說明書進(jìn)行，而且不明白RNA濃度高但電泳無條 帶的原理，就是濃度與完整性的關(guān)系。另外，如果出現(xiàn)這樣的問題，應(yīng)該如何避 免，蝦米還應(yīng)該如何操作？另附RNA和cDNA電泳圖兩張，請大俠指教！我的全部身 家就兩個金幣了……全都給你了……雖然不多…… PS:問題基本如下 1 電泳無條帶原因 2 RNA濃度與其完整性關(guān)系 3 出現(xiàn)問題，如何解決 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
346求調(diào)劑[0856]
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
一志愿山大07化學(xué) 332分 四六級已過 本科山東雙非 求調(diào)劑！
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
310求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
機(jī)械專碩299求調(diào)劑至材料
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
070300化學(xué)319求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
08工科 320總分 求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
一志愿天津大學(xué)化學(xué)工藝專業(yè)（081702）315分求調(diào)劑
已經(jīng)有12人回復(fù)
-
307求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
265求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
301求調(diào)劑
已經(jīng)有10人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 求助，GPC圖分析問題，求大俠指點(diǎn)！1
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 昆蟲RNA 提�。‰娪緢D，看不懂！請高手指點(diǎn)！
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 拜求各位大俠：怎樣測定發(fā)酵液中菌絲體濃度？
已經(jīng)有23人回復(fù)
- 求高手指點(diǎn)RNA電泳圖~~~~
已經(jīng)有25人回復(fù)
- 關(guān)于RNA電泳~~~請高手指點(diǎn)
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 【討論】微電子學(xué)專業(yè)與通信專業(yè)哪個比較好啊，求各位大俠指點(diǎn)。。。。。
已經(jīng)有29人回復(fù)
- 【求助/交流】總RNA反轉(zhuǎn)錄出的cDNA 怎樣檢測出來
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于建立cDNA文庫的諸多問題，拜請解答
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 【求助/交流】如果提RNA的樣品（葉片）有點(diǎn)降解，如何補(bǔ)救（盡量可以反轉(zhuǎn)出CDNA）？
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】求助高手-棉花中RNA提取質(zhì)量驗(yàn)證及反轉(zhuǎn)后cDNA質(zhì)量驗(yàn)證問題
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 【求助/交流】RNA反轉(zhuǎn)錄合成cDNA電泳圖
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 【求助/交流】從RNA到cDNA合成再到克隆PCR的實(shí)驗(yàn)技巧和操作細(xì)節(jié)問題若干，尋求解答
已經(jīng)有12人回復(fù)
mmojf
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 32.5
- 帖子: 12
- 在線: 8.5小時
- 蟲號: 1235512
- 注冊: 2011-03-16
- 專業(yè): 免疫生物學(xué)
5樓2011-06-10 22:41:32
yabxxh
木蟲 (正式寫手)
- BioEPI: 11
- 應(yīng)助: 22 (小學(xué)生)
- 貴賓: 0.005
- 金幣: 2238
- 散金: 98
- 紅花: 9
- 帖子: 465
- 在線: 88.6小時
- 蟲號: 157001
- 注冊: 2006-01-05
- 專業(yè): 生物物理、生物化學(xué)與分子
2樓2011-06-09 22:35:28
adslye
銀蟲 (正式寫手)
- BioEPI: 10
- 應(yīng)助: 6 (幼兒園)
- 貴賓: 0.244
- 金幣: 364.9
- 散金: 766
- 紅花: 6
- 帖子: 514
- 在線: 119.5小時
- 蟲號: 845336
- 注冊: 2009-09-11
- 性別: GG
- 專業(yè): 流行病學(xué)方法與衛(wèi)生統(tǒng)計
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★
silicare(金幣+6, EPI+1): 2011-06-10 12:22:39
silicare(金幣+6, EPI+1): 2011-06-10 12:22:39
|
我也深受這個問題困擾。后來我做了一系列降解實(shí)驗(yàn)（故意在一些環(huán)節(jié)出問題，看RNA提取情況）。 相信我，過程都是平行重復(fù)3次。有空我會把整個實(shí)驗(yàn)發(fā)出來。 這里直接說結(jié)果吧： 1.RNA幾乎不會在電泳過程中降解，無論是放了很久的膠，還是很久沒換水的電泳液。 2.OD比值只能大概參考。因?yàn)椋?60和280不知有RNA會吸收，還有很多其他物質(zhì)。最后這個比值可能是許多原因綜合的結(jié)果。 3.就是RNA部分降解也能反轉(zhuǎn)，PCR驗(yàn)證基本也沒問題。 另外，你的圖沒發(fā)上。具體情況沒發(fā)分析。 總之我的建議： 1.RNA提取的要點(diǎn)是選對方法，什么組織用什么方法（網(wǎng)上一堆方法，也有很多kit賣）。方法對了肯定能提出來，最多操作不好有部分降解。 2.操作嘛盡量快。 3.反轉(zhuǎn)錄的管子干凈，很多降解發(fā)生在反轉(zhuǎn)錄過程。但我的實(shí)驗(yàn)從沒出現(xiàn)過。 4.所有實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。是否3次都提不出來？3次都反轉(zhuǎn)沒結(jié)果？ 有重復(fù)性的失敗才有討論價值。 5.最后，RNA提取真的只是個非常小而簡單的實(shí)驗(yàn)，試劑是最重要的，不是怕污染而是怕過期！我用自來水溶RNA一樣條帶完整  （我當(dāng)時也被雷到）。 |
3樓2011-06-09 22:44:21
mmojf
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 32.5
- 帖子: 12
- 在線: 8.5小時
- 蟲號: 1235512
- 注冊: 2011-03-16
- 專業(yè): 免疫生物學(xué)
4樓2011-06-10 22:39:41
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 346求調(diào)劑[0856] +4 | WayneLim327 2026-03-16 | 7/350 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 297求調(diào)劑 +9 | 戲精丹丹丹 2026-03-17 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 085700資源與環(huán)境308求調(diào)劑 +12 | 墨墨漠 2026-03-18 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 354求調(diào)劑 +5 | Tyoumou 2026-03-18 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 274求調(diào)劑 +10 | S.H1 2026-03-18 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 材料專碩英一數(shù)二306 +7 | z1z2z3879 2026-03-18 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 321求調(diào)劑 +9 | 何潤采123 2026-03-18 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 350求調(diào)劑 +5 | weudhdk 2026-03-19 | 5/250 |
|
|
|
[考研] A區(qū)線材料學(xué)調(diào)劑 +5 | 周周無極 2026-03-20 | 5/250 |
|
|
|
[考研]
 295復(fù)試調(diào)劑
+8
|
簡木ChuFront 2026-03-19 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 261求B區(qū)調(diào)劑，科研經(jīng)歷豐富 +3 | 牛奶很忙 2026-03-20 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 281求調(diào)劑（0805） +14 | 煙汐憶海 2026-03-16 | 25/1250 |
|
|
|
[考博] 招收博士1-2人 +3 | QGZDSYS 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 本科鄭州大學(xué)物理學(xué)院，一志愿華科070200學(xué)碩，346求調(diào)劑 +4 | 我不是一根蔥 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 【同濟(jì)軟件】軟件（085405）考研求調(diào)劑 +3 | 2026eternal 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 收復(fù)試調(diào)劑生 +4 | 雨后秋荷 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 283求調(diào)劑 +3 | 聽風(fēng)就是雨； 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 326求調(diào)劑 +4 | 諾貝爾化學(xué)獎覬?/a> 2026-03-15 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 318求調(diào)劑 +3 | Yanyali 2026-03-15 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 288求調(diào)劑 +4 | 奇點(diǎn)0314 2026-03-14 | 4/200 |
|