 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2338 | 回復(fù): 10 | ||
| 本帖產(chǎn)生 1 個 BioEPI ，點擊這里進行查看 | ||
| 當前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
mmojf新蟲 (初入文壇)
|
[求助]
關(guān)于RNA以及cDNA電泳問題，拜求各位大俠指點
|
|
|
蝦米我實驗的目的是先提取RNA，然后將其反轉(zhuǎn)錄成cDNA，以cDNA為模板，進行 PCR以獲取目的片段。實驗材料為細菌，提取RNA 后進行紫外分光進行檢測濃度， 濃度比較高，260與280的OD比值也符合實驗要求。但是反轉(zhuǎn)錄后進行PCR無條 帶，高手指點后對RNA進行電泳，電泳無條帶，同時Marker有條帶，證明是可能是 RNA問題，個人總結(jié)認為是RNA發(fā)生降解，但不知道其降解過程發(fā)生在電泳過程中 還是保存過程中，提RNA完全按照說明書進行，而且不明白RNA濃度高但電泳無條 帶的原理，就是濃度與完整性的關(guān)系。另外，如果出現(xiàn)這樣的問題，應(yīng)該如何避 免，蝦米還應(yīng)該如何操作？另附RNA和cDNA電泳圖兩張，請大俠指教！我的全部身 家就兩個金幣了……全都給你了……雖然不多…… PS:問題基本如下 1 電泳無條帶原因 2 RNA濃度與其完整性關(guān)系 3 出現(xiàn)問題，如何解決 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
314求調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
08工科 320總分 求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
085601專碩，總分342求調(diào)劑，地區(qū)不限
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
085600材料與化工調(diào)劑 324分
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
311求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
化工學(xué)碩306求調(diào)劑
已經(jīng)有10人回復(fù)
-
286求調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
材料與化工一志愿南昌大學(xué)327求調(diào)劑推薦
已經(jīng)有9人回復(fù)
-
311求調(diào)劑
已經(jīng)有12人回復(fù)
-
271材料工程求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 求助，GPC圖分析問題，求大俠指點！1
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 昆蟲RNA 提��！電泳圖，看不懂！請高手指點！
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 拜求各位大俠：怎樣測定發(fā)酵液中菌絲體濃度？
已經(jīng)有23人回復(fù)
- 求高手指點RNA電泳圖~~~~
已經(jīng)有25人回復(fù)
- 關(guān)于RNA電泳~~~請高手指點
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 【討論】微電子學(xué)專業(yè)與通信專業(yè)哪個比較好啊，求各位大俠指點。。。。。
已經(jīng)有29人回復(fù)
- 【求助/交流】總RNA反轉(zhuǎn)錄出的cDNA 怎樣檢測出來
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于建立cDNA文庫的諸多問題，拜請解答
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 【求助/交流】如果提RNA的樣品（葉片）有點降解，如何補救（盡量可以反轉(zhuǎn)出CDNA）？
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】求助高手-棉花中RNA提取質(zhì)量驗證及反轉(zhuǎn)后cDNA質(zhì)量驗證問題
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 【求助/交流】RNA反轉(zhuǎn)錄合成cDNA電泳圖
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 【求助/交流】從RNA到cDNA合成再到克隆PCR的實驗技巧和操作細節(jié)問題若干，尋求解答
已經(jīng)有12人回復(fù)
mmojf
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 32.5
- 帖子: 12
- 在線: 8.5小時
- 蟲號: 1235512
- 注冊: 2011-03-16
- 專業(yè): 免疫生物學(xué)
7樓2011-06-10 22:53:24
yabxxh
木蟲 (正式寫手)
- BioEPI: 11
- 應(yīng)助: 22 (小學(xué)生)
- 貴賓: 0.005
- 金幣: 2238
- 散金: 98
- 紅花: 9
- 帖子: 465
- 在線: 88.6小時
- 蟲號: 157001
- 注冊: 2006-01-05
- 專業(yè): 生物物理、生物化學(xué)與分子
2樓2011-06-09 22:35:28
adslye
銀蟲 (正式寫手)
- BioEPI: 10
- 應(yīng)助: 6 (幼兒園)
- 貴賓: 0.244
- 金幣: 364.9
- 散金: 766
- 紅花: 6
- 帖子: 514
- 在線: 119.5小時
- 蟲號: 845336
- 注冊: 2009-09-11
- 性別: GG
- 專業(yè): 流行病學(xué)方法與衛(wèi)生統(tǒng)計
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★
silicare(金幣+6, EPI+1): 2011-06-10 12:22:39
silicare(金幣+6, EPI+1): 2011-06-10 12:22:39
|
我也深受這個問題困擾。后來我做了一系列降解實驗（故意在一些環(huán)節(jié)出問題，看RNA提取情況）。 相信我，過程都是平行重復(fù)3次。有空我會把整個實驗發(fā)出來。 這里直接說結(jié)果吧： 1.RNA幾乎不會在電泳過程中降解，無論是放了很久的膠，還是很久沒換水的電泳液。 2.OD比值只能大概參考。因為，260和280不知有RNA會吸收，還有很多其他物質(zhì)。最后這個比值可能是許多原因綜合的結(jié)果。 3.就是RNA部分降解也能反轉(zhuǎn)，PCR驗證基本也沒問題。 另外，你的圖沒發(fā)上。具體情況沒發(fā)分析。 總之我的建議： 1.RNA提取的要點是選對方法，什么組織用什么方法（網(wǎng)上一堆方法，也有很多kit賣）。方法對了肯定能提出來，最多操作不好有部分降解。 2.操作嘛盡量快。 3.反轉(zhuǎn)錄的管子干凈，很多降解發(fā)生在反轉(zhuǎn)錄過程。但我的實驗從沒出現(xiàn)過。 4.所有實驗重復(fù)3次。是否3次都提不出來？3次都反轉(zhuǎn)沒結(jié)果？ 有重復(fù)性的失敗才有討論價值。 5.最后，RNA提取真的只是個非常小而簡單的實驗，試劑是最重要的，不是怕污染而是怕過期！我用自來水溶RNA一樣條帶完整  （我當時也被雷到）。 |
3樓2011-06-09 22:44:21
mmojf
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 32.5
- 帖子: 12
- 在線: 8.5小時
- 蟲號: 1235512
- 注冊: 2011-03-16
- 專業(yè): 免疫生物學(xué)
4樓2011-06-10 22:39:41
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 08工科 320總分 求調(diào)劑 +5 | 梨花珞晚風 2026-03-17 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 化工學(xué)碩306求調(diào)劑 +10 | 42838695 2026-03-12 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 材料與化工一志愿南昌大學(xué)327求調(diào)劑推薦 +8 | Ncdx123456 2026-03-13 | 9/450 |
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +11 | 冬十三 2026-03-15 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 281求調(diào)劑（0805） +5 | 煙汐憶海 2026-03-16 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 能源材料化學(xué)課題組招收碩士研究生8-10名 +4 | 脫穎而出 2026-03-16 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 本人考085602 化學(xué)工程 專碩 +16 | 不知道叫什么！ 2026-03-15 | 18/900 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工 +4 | 安全上岸！ 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 化學(xué)調(diào)劑0703 +8 | 啊我我的 2026-03-11 | 8/400 |
|
|
|
[基金申請]
今年的國基金是打分制嗎？
 50+3
|
zhanghaozhu 2026-03-14 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 085600調(diào)劑 +5 | 漾漾123sun 2026-03-12 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 070303一志愿西北大學(xué)學(xué)碩310找調(diào)劑 +5 | d如愿上岸 2026-03-12 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 327求調(diào)劑 +6 | 拾光任染 2026-03-15 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 中科大材料專碩319求調(diào)劑 +3 | 孟鑫材料 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +6 | Mochaaaa 2026-03-12 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +5 | 一定有學(xué)上- 2026-03-12 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料301分求調(diào)劑 +5 | Liyouyumairs 2026-03-12 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 277求調(diào)劑 +4 | anchor17 2026-03-12 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 333求調(diào)劑 +3 | 152697 2026-03-12 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 081200-11408-276學(xué)碩求調(diào)劑 +3 | 崔wj 2026-03-12 | 4/200 |
|