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xuexue1204銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
PCR引物擴(kuò)增的問題
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我有一段基因經(jīng)普通PCR擴(kuò)增后是400多bp。同時(shí)，也用實(shí)時(shí)熒光定量PCR中與探針匹配的引物進(jìn)行了普通PCR,此PCR擴(kuò)增的片段是200在250bp之間，為什么兩對(duì)引物擴(kuò)增的片段大小不一樣呢？ 問題補(bǔ)充：普通PCR的引物與熒光PCR的引物是不一樣的。 還請(qǐng)大蝦們指點(diǎn)一二，不勝感激。 |
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2樓2011-06-11 08:32:53
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
xuexue1204(金幣+3): 明白了，自己懂得還是太少了，謝謝啊 2011-06-11 21:31:11
lstt09nk(金幣+5): 鼓勵(lì) 2011-06-12 19:07:13
xuexue1204(金幣+3): 明白了，自己懂得還是太少了，謝謝啊 2011-06-11 21:31:11
lstt09nk(金幣+5): 鼓勵(lì) 2011-06-12 19:07:13
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你的基因有400多bp吧，當(dāng)然你用來擴(kuò)增基因的引物必須是全長(zhǎng)引物，否則你得不到目的基因。至于熒光定量PCR引物，它不需要擴(kuò)增得到全長(zhǎng)，只需要在某個(gè)模版擴(kuò)增得到唯一特異的條帶就可以了。至于為什么是擴(kuò)增出200-250bp，請(qǐng)參見熒光定量引物的設(shè)計(jì)原則。 不知道解釋清楚了沒，呵呵 |
3樓2011-06-11 14:45:30
xuexue1204
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4樓2011-06-11 21:35:36
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5樓2011-06-12 07:59:30
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6樓2011-06-13 20:30:13
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