 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2468 | 回復(fù): 13 | ||
| 本帖產(chǎn)生 1 個 MolEPI ，點擊這里進(jìn)行查看 | ||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
[求助]
兩個基因融合不起來
|
||
|
現(xiàn)在在做基因的融合表達(dá)，把A和B兩個基因用overlapPCR的方法融合起來。A B兩個基因都用PCR的方法擴(kuò)出來了，大小與預(yù)期的大小一致，并且都是用的保真酶。但overlapPCR就是做不好，兩個基因怎么也融合不到一起，都做了好幾遍了，我用的是PFU酶，2kb/min,融合基因大概2500bp,是不是酶的問題啊，擴(kuò)增速度太慢了？ 還有就是我的A基因是直接從基因組中擴(kuò)增的，B基因是從構(gòu)建好的PQE載體中擴(kuò)增的。是不是必須要從構(gòu)建好的載體中擴(kuò)增啊？哪位高手指點下啊 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有203人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 幼稚問題一個，在Genbank上查某基因，為何會出現(xiàn)兩個mRNA，兩個CDS區(qū)？
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 為什么水溶液制備金納米顆粒出現(xiàn)了不同的形狀，而且兩個粒子還有融合的現(xiàn)象？
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 融合基因，選什么樣的酶？
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 將質(zhì)粒上緊挨著的兩個酶切位點進(jìn)行雙酶切后連接外源基因片段，是不是不好連接？
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 怎樣把兩個基因的序列串聯(lián)起來并且生成FASAT格式？
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 兩個基因序列能不能做熒光定量PCR？請教大家一下！��！
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 把兩段基因片段連接起來應(yīng)該用什么技術(shù)？
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【求助/交流】急！關(guān)于外源基因在絲狀真菌中的融合表達(dá)
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【轉(zhuǎn)帖】兩基因控制西紅柿保鮮期
已經(jīng)有13人回復(fù)
9樓2011-06-13 18:24:44
西瓜
榮譽(yù)版主 (知名作家)
- MolEPI: 50
- 應(yīng)助: 94 (初中生)
- 貴賓: 3.157
- 金幣: 1849.6
- 散金: 11458
- 紅花: 116
- 沙發(fā): 21
- 帖子: 7553
- 在線: 1449.5小時
- 蟲號: 271749
- 注冊: 2006-08-13
- 性別: GG
- 專業(yè): 細(xì)胞衰老
- 管轄: 分子生物
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
da_da(金幣+2): 2011-06-13 18:35:28
da_da(金幣+1): 2011-06-15 10:06:41
dhd997(金幣+5): good 2011-07-04 18:04:43
da_da(金幣+2): 2011-06-13 18:35:28
da_da(金幣+1): 2011-06-15 10:06:41
dhd997(金幣+5): good 2011-07-04 18:04:43
|
基因從哪里擴(kuò)增出來的沒關(guān)系的。 Overlaping PCR的產(chǎn)物一般很少的，條帶很淡，你的圖最好上來看看。我做的一般上10ul的樣，能看到淡淡的條帶就ok，有雜帶也ok，因為我們還會再拿這個產(chǎn)物作為模板再進(jìn)行一次擴(kuò)增。 我印象中Pfu酶的擴(kuò)增速度比Taq會慢很多，Taq一般是1kb/min，Pfu是600bp/min左右，樓主用的哪家的Pfu酶？2kb/min很快啊。 |
2樓2011-06-12 17:45:06
lxj341401
至尊木蟲 (著名寫手)
- MolEPI: 58
- 應(yīng)助: 388 (碩士)
- 貴賓: 0.238
- 金幣: 17138.7
- 紅花: 43
- 帖子: 2251
- 在線: 712.4小時
- 蟲號: 111074
- 注冊: 2005-11-20
- 專業(yè): 生物化學(xué)
3樓2011-06-12 20:04:47
4樓2011-06-12 20:43:16
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 材料/農(nóng)業(yè)專業(yè)，07/08開頭均可，過線就行 +3 | 呵唔哦豁 2026-03-23 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿中南大學(xué)化學(xué)學(xué)碩0703總分337求調(diào)劑 +5 | niko- 2026-03-22 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿南航材料專317分求調(diào)劑 +3 | 炸呀炸呀炸薯條 2026-03-23 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 336化工調(diào)劑 +4 | 王大坦1 2026-03-23 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿南京理工大學(xué)085701資源與環(huán)境302分求調(diào)劑 +5 | 葵梓衛(wèi)隊 2026-03-18 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 工科材料085601 279求調(diào)劑 +8 | 困于星晨 2026-03-17 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 276求調(diào)劑。有半年電池和半年高分子實習(xí)經(jīng)歷 +8 | 材料學(xué)257求調(diào)劑 2026-03-23 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 289材料與化工（085600）B區(qū)求調(diào)劑 +3 | 這么名字咋樣 2026-03-22 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿華中農(nóng)業(yè)071010，總分320求調(diào)劑 +5 | 困困困困坤坤 2026-03-20 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +4 | 來好運來來來 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿南大，0703化學(xué)，分?jǐn)?shù)336，求調(diào)劑 +3 | 收到VS 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料與化工（0856）304求 B區(qū) 調(diào)劑 +3 | 邱gl 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 南昌大學(xué)材料專碩311分求調(diào)劑 +6 | 77chaselx 2026-03-20 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 299求調(diào)劑 +6 | △小透明* 2026-03-17 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿華南師大 070300（化學(xué)）304分求調(diào)劑 +3 | 0703武芊慧雪304 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿西南交大，求調(diào)劑 +5 | 材化逐夢人 2026-03-18 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 317求調(diào)劑 +5 | 申子申申 2026-03-19 | 9/450 |
|
|
|
[考研] A區(qū)線材料學(xué)調(diào)劑 +5 | 周周無極 2026-03-20 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 261求B區(qū)調(diào)劑，科研經(jīng)歷豐富 +3 | 牛奶很忙 2026-03-20 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料學(xué)碩318求調(diào)劑 +5 | February_Feb 2026-03-19 | 5/250 |
|