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wywangying169銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
兩次QPCR前后目的基因的CT值不一樣
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| 我做了20個樣本的QPCR，相對定量，因為其中一兩個基因結(jié)果不好，重復性太差，于是選擇重做，為了使補做的樣本能和原來的樣本之間能進行對比，采用了已經(jīng)做好的某一樣本當成對照一起做。問題是做出來了的對照和原來實驗的CT值差了4，但是我的實驗是沒有問題。我想找理由，WHY？望QPCR高手解答。。。 |
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2樓2011-06-16 16:25:33
wywangying169
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3樓2011-06-16 16:31:12
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4樓2011-06-17 21:47:34
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silicare
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【答案】應助回帖
★ ★
wywangying169(金幣+4): 我做的相對定量，當然會加內(nèi)參了。。。那就是我太傲慢了，對自已做過成千上百次的實驗太過于有信心了吧。。具體理由也就不說了，我只是覺得大家肯定都有忽略的地方。。 2011-06-20 08:42:36
lstt09nk(金幣+2): 感謝參與 2011-06-20 13:10:43
wywangying169(金幣+4): 我做的相對定量，當然會加內(nèi)參了。。。那就是我太傲慢了，對自已做過成千上百次的實驗太過于有信心了吧。。具體理由也就不說了，我只是覺得大家肯定都有忽略的地方。。 2011-06-20 08:42:36
lstt09nk(金幣+2): 感謝參與 2011-06-20 13:10:43
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CT差4，模板就是十幾倍出去了，所以可以基本排除加樣誤差 那就八成出在了擴增效率上 也就是你用的mix 同時，做對照你應該必須加上內(nèi)參 其次，你的實驗出了這么大的問題，你還說：“但是我的實驗是沒有問題”，心態(tài)上也需要調(diào)整一下 |
6樓2011-06-20 08:30:48
momo2111
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7樓2013-07-12 15:49:12
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