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snoopyzxx木蟲 (著名寫手)
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[求助]
酵母表達，為什么表達不出來？
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最近做一個蛋白的畢赤酵母表達，具體過程如下： A、將種子菌液20ul接種至5ml YPD培養(yǎng)基中，30℃搖菌過夜。 B．取2.5ml至250ml BMGY培養(yǎng)基中（1%），30℃培養(yǎng)至OD600值5左右. C、5000rpm離心5min，去上清，加入BMMY培養(yǎng)基重懸，使OD600等于1（實為0.89左右）. D、30℃誘導培養(yǎng)，每隔24小時補加甲醇，使其終濃度為0.5%（我是以24小時甲醇全部消耗光來看的，所以補加0.5%的甲醇）。 E、30℃，誘導72h。 F、離心，取上清，補加適量緩沖后，0.45um過濾，純化。 結(jié)果，GST純化，純化出來，只看到gst標簽大小的蛋白，比目的蛋白小20多KD。 想問下大家，我的這個過程有沒有什么問題？ |
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