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snoopyzxx木蟲(chóng) (著名寫手)
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[求助]
酵母表達(dá)，為什么表達(dá)不出來(lái)？
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最近做一個(gè)蛋白的畢赤酵母表達(dá)，具體過(guò)程如下： A、將種子菌液20ul接種至5ml YPD培養(yǎng)基中，30℃搖菌過(guò)夜。 B．取2.5ml至250ml BMGY培養(yǎng)基中（1%），30℃培養(yǎng)至OD600值5左右. C、5000rpm離心5min，去上清，加入BMMY培養(yǎng)基重懸，使OD600等于1（實(shí)為0.89左右）. D、30℃誘導(dǎo)培養(yǎng)，每隔24小時(shí)補(bǔ)加甲醇，使其終濃度為0.5%（我是以24小時(shí)甲醇全部消耗光來(lái)看的，所以補(bǔ)加0.5%的甲醇）。 E、30℃，誘導(dǎo)72h。 F、離心，取上清，補(bǔ)加適量緩沖后，0.45um過(guò)濾，純化。 結(jié)果，GST純化，純化出來(lái)，只看到gst標(biāo)簽大小的蛋白，比目的蛋白小20多KD。 想問(wèn)下大家，我的這個(gè)過(guò)程有沒(méi)有什么問(wèn)題？ |
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