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[求助]
western和PCR選擇問題
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| 做細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn),想測(cè)定caspase-3,9蛋白,想問下是用半定量PCR還是western對(duì)其進(jìn)行測(cè)定比較好?是不是都是說明凋亡問題,哪個(gè)更好一點(diǎn),還是其中一個(gè)用PCR另一個(gè)用western?請(qǐng)?jiān)敿?xì)說明一下二者的區(qū)別,測(cè)定后分別能說明的問題!新手請(qǐng)教高手幫忙! |
【分子生物】EPI帖 |
木蟲 (正式寫手)
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Caspase-3正常以酶原(32KD)的形式存在于胞漿中,在凋亡的早期階段,它被激活,活化的Caspase-3由兩個(gè)大亞基(17KD)和兩個(gè)小亞基(12KD)組成,裂解相應(yīng)的胞漿胞核底物,最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。但在細(xì)胞凋亡的晚期和死亡細(xì)胞,caspase-3的活性明顯下降。 一般檢測(cè)凋亡要有pro-caspase3(32KD)減少的趨勢(shì),活化caspase3(17KD)增加的趨勢(shì)。這是指western PCR 需要做一下的,但是結(jié)果不一定和western的一致。因?yàn)閏aspase的變化主要是蛋白的活化。 caspase9 買相應(yīng)抗體即可 |
木蟲 (正式寫手)
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檢測(cè)凋亡的話用PCR沒用,mRNA水平的變化不能直接聯(lián)系到凋亡水平上。你需要做更直接的檢測(cè),比如LS說的caspase3 cleavage實(shí)驗(yàn)。 除此之外,還有很多其他手段檢測(cè)細(xì)胞凋亡。 比如roche的 Cell death Elisa 試劑盒 酶學(xué)檢測(cè)來測(cè)定caspase 3 activity(這個(gè)也有專門的試劑盒) 或者更直接點(diǎn)用凋亡敏感的染料直接染細(xì)胞 如PI、ANNEXIN V等,直接鏡檢或者上流式細(xì)胞儀都可以。 現(xiàn)在的文章中比較主流的數(shù)據(jù)都是一些試劑盒或者是流式的數(shù)據(jù)。這些比較可信。 |

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