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急求釀酒酵母的電轉(zhuǎn)感受態(tài)制備方法和轉(zhuǎn)化方法
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Neo2000
木蟲 (著名寫手)
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- 專業(yè): 生物物理、生物化學(xué)與分子
7樓2014-04-11 20:15:10
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金幣+5, EPI+1): good 2011-07-01 01:52:39
dhd997(金幣+5, EPI+1): good 2011-07-01 01:52:39
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(1)接種工業(yè)酒精酵母至30 mL液體YEPD培養(yǎng)基，30 o C培養(yǎng)12 h； (2)取培養(yǎng)物以1%的接種量轉(zhuǎn)接到30 mL新鮮YEPD液體培養(yǎng)基中，30 o C培養(yǎng)8 h， 使菌體達(dá)到同步生長狀態(tài)； (3)將酵母培養(yǎng)物置于冰上放置30 min后，6,000 r/min離心5 min收集菌體； (4)棄上清，加入已預(yù)冷的15 mL超純水洗滌菌體一次； (5)6,000 r/min離心5 min收集菌體，用15 mL 1 mol/L山梨醇重復(fù)洗滌菌體三次； (6)離心收集菌體，加入200μL 1 mol/L山梨醇重懸浮菌體，取200μL的菌懸液至1.5 mL 離心管中； (7)在制得的菌懸液中加入20μL(≤5μg)待轉(zhuǎn)化的質(zhì)�；駾NA片段，輕輕混勻后冰浴 10 min； (8)將冰浴后的菌懸液轉(zhuǎn)入已預(yù)冷的電轉(zhuǎn)杯中，1,500 V電擊5 ms； (9)加入適量體積的1 mol/L山梨醇將電轉(zhuǎn)后的菌懸液從電轉(zhuǎn)杯中洗出，取200μL涂布 相應(yīng)的抗性平板； (10)30度培養(yǎng)3-5天挑選轉(zhuǎn)化子。 |
2樓2011-06-30 21:28:08
3樓2011-07-01 09:40:05
4樓2011-07-01 10:50:06
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