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急求釀酒酵母的電轉感受態(tài)制備方法和轉化方法
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| 急求釀酒酵母的電轉感受態(tài)制備方法和電轉化方法,不勝感激 |
木蟲 (著名寫手)
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(1)接種工業(yè)酒精酵母至30 mL液體YEPD培養(yǎng)基,30 o C培養(yǎng)12 h; (2)取培養(yǎng)物以1%的接種量轉接到30 mL新鮮YEPD液體培養(yǎng)基中,30 o C培養(yǎng)8 h, 使菌體達到同步生長狀態(tài); (3)將酵母培養(yǎng)物置于冰上放置30 min后,6,000 r/min離心5 min收集菌體; (4)棄上清,加入已預冷的15 mL超純水洗滌菌體一次; (5)6,000 r/min離心5 min收集菌體,用15 mL 1 mol/L山梨醇重復洗滌菌體三次; (6)離心收集菌體,加入200μL 1 mol/L山梨醇重懸浮菌體,取200μL的菌懸液至1.5 mL 離心管中; (7)在制得的菌懸液中加入20μL(≤5μg)待轉化的質粒或DNA片段,輕輕混勻后冰浴 10 min; (8)將冰浴后的菌懸液轉入已預冷的電轉杯中,1,500 V電擊5 ms; (9)加入適量體積的1 mol/L山梨醇將電轉后的菌懸液從電轉杯中洗出,取200μL涂布 相應的抗性平板; (10)30度培養(yǎng)3-5天挑選轉化子。 |
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