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[交流]
請問兩個關于denature PAGE的問題~ 已有2人參與
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我用denature PAGE(urea)跑DNA, 感覺遷移率非常的慢,這是正常的么?我平時跑蛋白頂多1個小時,這樣感覺至少要2,3個小時,我跑的DNA片段很小20-70bp,用的12%的膠,請問大牛大概要跑多長時間? 還有一個問題,就是我跑覺的時候,current的電壓會隨著時間變動,我已經選了電泳constant了。以前從來不會變的。這是膠或者buffer有問題么?還是電泳儀mode的問題?還是說跑這種電泳就是會這樣? 求大牛解釋!多謝! |
榮譽版主 (知名作家)
至尊木蟲 (正式寫手)
榮譽版主 (知名作家)
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緩沖液的問題或者是電泳儀設定的問題。 電泳液的體系是隨著電泳的進行是不斷變化的,可以設定恒壓或者恒流,但是恒壓時,電流是隨著電泳進行不斷變大的,反之亦然。 電泳儀有保護功能,設定恒壓時,設定的電流為允許的最大電流,當電流超過這個最大值時會自動切換成恒流,此時隨著電泳進行變化的就是電壓了。 你看看一般跑DNA時的電壓是多少,可能是跑蛋白的參數(shù)不適合于DNA,可以把最大電流值設置大一些。如果參數(shù)設置沒錯,那就是緩沖液不行,重新配緩沖液。 |
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