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zsa513新蟲 (初入文壇)
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[交流]
請問兩個關(guān)于denature PAGE的問題~ 已有2人參與
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我用denature PAGE(urea)跑DNA, 感覺遷移率非常的慢，這是正常的么？我平時跑蛋白頂多1個小時，這樣感覺至少要2，3個小時，我跑的DNA片段很小20-70bp，用的12%的膠，請問大牛大概要跑多長時間啊？ 還有一個問題，就是我跑覺的時候，current的電壓會隨著時間變動，我已經(jīng)選了電泳constant了。以前從來不會變的。這是膠或者buffer有問題么？還是電泳儀mode的問題？還是說跑這種電泳就是會這樣？ 求大牛解釋！多謝！ |
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zhoujunnju
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dhd997(金幣+3): 2011-07-04 18:06:56
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緩沖液的問題或者是電泳儀設(shè)定的問題。 電泳液的體系是隨著電泳的進(jìn)行是不斷變化的，可以設(shè)定恒壓或者恒流，但是恒壓時，電流是隨著電泳進(jìn)行不斷變大的，反之亦然。 電泳儀有保護(hù)功能，設(shè)定恒壓時，設(shè)定的電流為允許的最大電流，當(dāng)電流超過這個最大值時會自動切換成恒流，此時隨著電泳進(jìn)行變化的就是電壓了。 你看看一般跑DNA時的電壓是多少，可能是跑蛋白的參數(shù)不適合于DNA，可以把最大電流值設(shè)置大一些。如果參數(shù)設(shè)置沒錯，那就是緩沖液不行，重新配緩沖液。 |
4樓2011-07-04 09:46:41
zsa513
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6樓2011-07-04 20:24:01
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7樓2011-07-05 23:55:37
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8樓2011-07-07 00:09:45
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