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happywoheni鐵蟲 (小有名氣)
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[求助]
關(guān)于pet28克隆載體
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| pcr產(chǎn)物和pet28質(zhì)粒經(jīng)雙酶切之后可以直接連接轉(zhuǎn)化到大腸DH5a嗎？pet28好像是低拷貝的，怎樣提高拷貝數(shù)？EcoR1和BamH1同時切還是分步切？用哪種酶切緩沖液？酶切完了是不是都要進(jìn)行電泳回收片段？ |
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zj20101989
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4樓2011-07-21 21:49:55
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【答案】應(yīng)助回帖
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西瓜(金幣+3, EPI+1): 熱心！關(guān)于是否需要回收的解釋很到位。 2011-07-22 12:02:27
西瓜(金幣+3, EPI+1): 熱心！關(guān)于是否需要回收的解釋很到位。 2011-07-22 12:02:27
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質(zhì)粒的拷貝數(shù)跟感受態(tài)受體菌有關(guān)系，跟質(zhì)粒自身的特性也有關(guān)系。你可以把篩選的陽性克隆過夜搖菌后再加阿拉伯糖搖4-5小時提質(zhì)粒，這樣可以提高拷貝數(shù)。兩種酶可以同時切，緩沖液你到他們網(wǎng)站上就能查到，不過剛開始做實(shí)驗(yàn)建議你分步切。是不是要進(jìn)行回收要看你酶切的目的，如果只是為了鑒定就不用回收，如果片段還要用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)?zāi)蔷托枰厥? |
5樓2011-07-22 11:03:59
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