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xiaoyu1014126木蟲 (正式寫手)
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[求助]
重組的質粒提取出來線性總是比超螺旋的多很多呢？
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| 3kb和1kb 的片段分別與pET29酶連后，轉進TOP10，提取出來（同時操作），1kb的質粒很正常，可是為什么3kb的質粒提取出來后線性總是比超螺旋的多很多呢？超螺旋的只有一點點痕跡。提取出來的質粒再轉進BL21中，再從BL21中提取，任然發(fā)生相同的情況，同樣是1kb的重組質粒正常，而3kb的質粒線性總是比超螺旋的多很多啊~~糾結？ |
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【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金幣+5): 鼓勵 2011-07-16 18:11:00
xiaoyu1014126(金幣+4): 2011-07-16 22:41:50
dhd997(金幣+5): 鼓勵 2011-07-16 18:11:00
xiaoyu1014126(金幣+4): 2011-07-16 22:41:50
| 電泳進行鑒定質粒DNA時，多數(shù)情況下你能看到三條帶，不要認為是超螺旋、線性和開環(huán)這三條帶，質粒樣品中是不含線性DNA的，單酶切后線性化質粒后再電泳，就會看到線性質粒DNA的位置與這三條帶的位置不一樣。其實這三條帶以電泳速度的快慢而排序，分別是超螺旋、開環(huán)和復制中間體。有時會出現(xiàn)兩條帶，甚至一條(一般是超螺旋的質粒)，這跟上樣量也有些關系。出現(xiàn)不同的結果都是由抽提質粒時的操作手法造成的。如果嚴格按照操作步驟，超螺旋的質粒會較多。酶切后線性化條帶電泳時所處的位置就指示質粒的大小。 |
3樓2011-07-16 15:07:29
西瓜
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不解，幫頂 2樓2011-07-15 23:28:00
xiaoyu1014126
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4樓2012-02-20 16:20:18
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