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xiaoyu1014126木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[求助]
重組的質(zhì)粒提取出來(lái)線(xiàn)性總是比超螺旋的多很多呢？
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| 3kb和1kb 的片段分別與pET29酶連后，轉(zhuǎn)進(jìn)TOP10，提取出來(lái)（同時(shí)操作），1kb的質(zhì)粒很正常，可是為什么3kb的質(zhì)粒提取出來(lái)后線(xiàn)性總是比超螺旋的多很多呢？超螺旋的只有一點(diǎn)點(diǎn)痕跡。提取出來(lái)的質(zhì)粒再轉(zhuǎn)進(jìn)BL21中，再?gòu)腂L21中提取，任然發(fā)生相同的情況，同樣是1kb的重組質(zhì)粒正常，而3kb的質(zhì)粒線(xiàn)性總是比超螺旋的多很多啊~~糾結(jié)？ |
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xiaoyu1014126
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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4樓2012-02-20 16:20:18
西瓜
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不解，幫頂 2樓2011-07-15 23:28:00
【答案】應(yīng)助回帖
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dhd997(金幣+5): 鼓勵(lì) 2011-07-16 18:11:00
xiaoyu1014126(金幣+4): 2011-07-16 22:41:50
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xiaoyu1014126(金幣+4): 2011-07-16 22:41:50
| 電泳進(jìn)行鑒定質(zhì)粒DNA時(shí)，多數(shù)情況下你能看到三條帶，不要認(rèn)為是超螺旋、線(xiàn)性和開(kāi)環(huán)這三條帶，質(zhì)粒樣品中是不含線(xiàn)性DNA的，單酶切后線(xiàn)性化質(zhì)粒后再電泳，就會(huì)看到線(xiàn)性質(zhì)粒DNA的位置與這三條帶的位置不一樣。其實(shí)這三條帶以電泳速度的快慢而排序，分別是超螺旋、開(kāi)環(huán)和復(fù)制中間體。有時(shí)會(huì)出現(xiàn)兩條帶，甚至一條(一般是超螺旋的質(zhì)粒)，這跟上樣量也有些關(guān)系。出現(xiàn)不同的結(jié)果都是由抽提質(zhì)粒時(shí)的操作手法造成的。如果嚴(yán)格按照操作步驟，超螺旋的質(zhì)粒會(huì)較多。酶切后線(xiàn)性化條帶電泳時(shí)所處的位置就指示質(zhì)粒的大小。 |
3樓2011-07-16 15:07:29
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