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happywoheni鐵蟲 (小有名氣)
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[求助]
pcr產(chǎn)物測(cè)序問題
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| 前兩天把pcr產(chǎn)物送去測(cè)序了，只有上下游引物沒有測(cè)出來，比目的基因少了幾十bp,這樣得到的序列有用嗎？是不是要進(jìn)行下一步連接轉(zhuǎn)化后再測(cè)序更好？ |
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2樓2011-07-22 12:28:06
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4樓2011-07-22 12:32:04
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5樓2011-07-22 12:38:48
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6樓2011-07-22 12:43:57
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7樓2011-07-22 15:50:26
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| 雙脫氧鏈終止法測(cè)序原理：核酸模板在核酸聚合酶、引物、四種單脫氧堿基存在條件下復(fù)制或轉(zhuǎn)錄時(shí)，如果在四管反應(yīng)系統(tǒng)中分別按比例引入四種雙脫氧堿基，只要雙脫氧堿基摻入鏈端，該鏈就停止延長，鏈端摻入單脫氧堿基的片段可繼續(xù)延長。如此每管反應(yīng)體系中便合成以共同引物為5’端，以雙脫氧堿基為3’端的一系列長度不等的核酸片段。反應(yīng)終止后，分四個(gè)泳道進(jìn)行電泳。以分離長短不一的核酸片段(長度相鄰者僅差一個(gè)堿基)，根據(jù)片段3’端的雙脫氧堿基，便可依次閱讀合成片段的堿基排列順序。 |
8樓2011-07-22 20:37:43
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9樓2011-07-22 20:41:28
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10樓2011-07-22 20:43:34
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