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使用NOVAGEN的His-tag蛋白純化柱出現(xiàn)的問題
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| 我過柱子之后，在加elute之前的接樣中出現(xiàn)了目的蛋白，但在加elute之后的接樣中目的蛋白量很少，而且有雜帶，為什么呢？還有就是該怎樣清洗柱子呢,每一步中各物質(zhì)的作用是什么呢？謝謝高人指點 |
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冼亮淀粉酶
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dhd997(金幣+3): good 2011-07-30 13:22:28
dhd997(金幣+3): good 2011-07-30 13:22:28
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沒加洗脫液就有目的蛋白質(zhì)，說明你的蛋白質(zhì)沒能被吸附，可能是填料沒處理好，吸附狀態(tài)不佳；標(biāo)簽被蛋白質(zhì)折疊進(jìn)結(jié)構(gòu)內(nèi)部，吸附不上；你的蛋白質(zhì)樣品中有咪唑？（這個估計不大可能） 洗脫液要設(shè)置洗脫梯度，咪唑濃度依次升高，例如20、50、100、150、200、500mM，一般在前面4個梯度就能洗脫完目的蛋白質(zhì)了。也有可能這4個梯度都能洗脫下來目的蛋白質(zhì)，那就同時看哪個洗脫液的比較純。 |
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yeshui
2樓2011-07-27 09:54:26
3樓2011-07-27 10:18:32
冼亮淀粉酶
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4樓2011-07-27 10:22:57
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