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[求助]
使用NOVAGEN的His-tag蛋白純化柱出現(xiàn)的問(wèn)題
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| 我過(guò)柱子之后，在加elute之前的接樣中出現(xiàn)了目的蛋白，但在加elute之后的接樣中目的蛋白量很少，而且有雜帶，為什么呢？還有就是該怎樣清洗柱子呢,每一步中各物質(zhì)的作用是什么呢？謝謝高人指點(diǎn) |
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送鮮花一朵 
3樓2011-07-27 10:18:32
冼亮淀粉酶
專(zhuān)家顧問(wèn) (知名作家)
生物大分子降解酶
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專(zhuān)家經(jīng)驗(yàn): +248 - MolEPI: 46
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- 專(zhuān)業(yè): 環(huán)境微生物學(xué)
- 管轄: 微生物
★ ★ ★
dhd997(金幣+3): good 2011-07-30 13:22:28
dhd997(金幣+3): good 2011-07-30 13:22:28
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沒(méi)加洗脫液就有目的蛋白質(zhì)，說(shuō)明你的蛋白質(zhì)沒(méi)能被吸附，可能是填料沒(méi)處理好，吸附狀態(tài)不佳；標(biāo)簽被蛋白質(zhì)折疊進(jìn)結(jié)構(gòu)內(nèi)部，吸附不上；你的蛋白質(zhì)樣品中有咪唑？（這個(gè)估計(jì)不大可能） 洗脫液要設(shè)置洗脫梯度，咪唑濃度依次升高，例如20、50、100、150、200、500mM，一般在前面4個(gè)梯度就能洗脫完目的蛋白質(zhì)了。也有可能這4個(gè)梯度都能洗脫下來(lái)目的蛋白質(zhì)，那就同時(shí)看哪個(gè)洗脫液的比較純。 |
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2樓2011-07-27 09:54:26
冼亮淀粉酶
專(zhuān)家顧問(wèn) (知名作家)
生物大分子降解酶
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4樓2011-07-27 10:22:57
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