 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2536 | 回復(fù): 12 | ||||
| 本帖產(chǎn)生 2 個(gè) MolEPI ，點(diǎn)擊這里進(jìn)行查看 | ||||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | ||||
rainontime新蟲 (小有名氣)
|
[求助]
求助 雙酶切驗(yàn)證陽(yáng)性克隆的問題
|
|||
本人將某 2600bp的目的基因 和 pet28a載體 雙酶切，切膠回收，T4連接酶4度過夜連接， 將10uL連接產(chǎn)物加到120uL感受態(tài)細(xì)胞中， 加入800uL無(wú)抗性培養(yǎng)基 搖菌50分鐘， 涂平板10塊，每塊80uL, 過夜后，發(fā)現(xiàn)只長(zhǎng)了一個(gè)菌落。。。挑取菌落培養(yǎng)，提取質(zhì)粒，雙酶切驗(yàn)證是否是陽(yáng)性克隆，切成了兩條片段，發(fā)現(xiàn)其中較短的那條片段比目的片段長(zhǎng)！�。。。。。≌�(qǐng)問這是咋回事？謝謝�。�！ |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有273人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
邵陽(yáng)學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
湖北師范大學(xué)招調(diào)劑啦
已經(jīng)有3人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 關(guān)于酶切驗(yàn)證克隆的一點(diǎn)點(diǎn)小疑問！
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助】基因克隆T載體酶切問題等
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【分享】分子克隆實(shí)驗(yàn)專題-（二）酶切連接要點(diǎn)探討
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 【求助/交流】目的基因與pPIC9K連接的問題！
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 【求助/交流】連接實(shí)驗(yàn)假陽(yáng)性加多如何解決
已經(jīng)有20人回復(fù)
- 【求助/交流】分子克隆后M13引物PCR擴(kuò)增
已經(jīng)有32人回復(fù)
- 【求助/交流】為什么我的PCR產(chǎn)物總是連接不上T載體
已經(jīng)有26人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于酶切連接轉(zhuǎn)化的問題
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 【求助/交流】基因克隆時(shí)，酶切有結(jié)果，PCR卻P不出來
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 【求助/交流】連接產(chǎn)物電泳
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 【求助/交流】請(qǐng)教一個(gè)克隆的問題，很棘手！
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 【求助/交流】單酶切連接的克隆急……
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 【求助/交流】連接表達(dá)載體PET-28A失敗原因
已經(jīng)有23人回復(fù)
d1emon
銅蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 877.5
- 帖子: 30
- 在線: 24.9小時(shí)
- 蟲號(hào): 659198
- 注冊(cè): 2008-11-21
- 專業(yè): 蛋白質(zhì)組學(xué)
4樓2011-08-01 19:17:22
【答案】應(yīng)助回帖
rainontime(金幣+1): 不錯(cuò)的 2011-08-01 18:10:16
1949stone(MolEPI+1): 不錯(cuò) 不錯(cuò) 2011-08-01 20:31:33
1949stone(MolEPI+1): 不錯(cuò) 不錯(cuò) 2011-08-01 20:31:33
|
這是很正常的，一般酶切后的目的片段往往比pcr擴(kuò)增得到的跑膠拖后，主要有以下幾個(gè)物理因素造成： 1，因?yàn)檩d體屬于比較大的分子了，質(zhì)粒如果濃度較高的話，難免分子間的作用力較強(qiáng)，因?yàn)檫@種力的存在導(dǎo)致了目的片段跑膠速度較慢！ 2, 可能切得時(shí)間比較長(zhǎng)，導(dǎo)致許多分子雜質(zhì)增多！ 3，如果很靠后的話極有可能你的凝膠濃度不均勻…… 暫時(shí)想到這么多！ |
2樓2011-08-01 17:23:48
rainontime
新蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 780.6
- 散金: 272
- 紅花: 1
- 帖子: 132
- 在線: 110.8小時(shí)
- 蟲號(hào): 994727
- 注冊(cè): 2010-04-12
- 專業(yè): 藥理學(xué)其他科學(xué)問題
3樓2011-08-01 18:08:50
天使托
專家顧問 (職業(yè)作家)
T.Shen
-
專家經(jīng)驗(yàn): +57 - MolEPI: 106
- 應(yīng)助: 95 (初中生)
- 貴賓: 0.263
- 金幣: 16348.8
- 散金: 593
- 紅花: 74
- 沙發(fā): 9
- 帖子: 3652
- 在線: 289小時(shí)
- 蟲號(hào): 441757
- 注冊(cè): 2007-10-27
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
- 管轄: 微生物
【答案】應(yīng)助回帖
1949stone(MolEPI+1): 來也 2011-08-01 20:32:03
|
1：連接體系不知道你選擇的合適不，涂布了那么多板子怎么就長(zhǎng)了一個(gè)單克隆，個(gè)人覺得你先從連接體系上著手，提高了連接的效率才能保證你做一次連接的成功率啊，你說是不？連接體系你先得定量看看你的載體和目的基因的量，如果量差不多的話，目的基因多加一些；當(dāng)然了你要確定你的載體和基因酶切完全了； 2：至于驗(yàn)證嘛，很簡(jiǎn)單的，先把長(zhǎng)出來的單克隆劃到相同抗性的板子上，然后做一個(gè)PCR初步驗(yàn)證看看，如果能夠P出來大小相同的一條帶那很有可能就對(duì)了，然后再提取質(zhì)粒進(jìn)行酶切驗(yàn)證就OK了。 |
5樓2011-08-01 19:59:14
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考博] 材料專業(yè)申博 +3 | 杜雨婷dyt 2026-03-29 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 085600 295分求調(diào)劑 +7 | W55j 2026-03-30 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑 +4 | GK72 2026-03-30 | 4/200 |
|
|
[考研] 346求調(diào)劑 一志愿070303有機(jī)化學(xué) +7 | 蘿卜燉青菜 2026-03-28 | 8/400 |
|
|
|
[考研]
 304材料求調(diào)劑
+5
|
鐘llll 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 324求調(diào)劑 +9 | hanamiko 2026-03-26 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 求化學(xué)調(diào)劑 +11 | wulanna 2026-03-28 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 282求調(diào)劑 +4 | wcq131415 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0856求調(diào)劑 +8 | 楒桉 2026-03-28 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 085404求調(diào)劑，總分309，本科經(jīng)歷較為豐富 +6 | 來財(cái)aa 2026-03-25 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 289求調(diào)劑 +5 | BrightLL 2026-03-29 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 298求調(diào)劑 +3 | 種圣賜 2026-03-29 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 298求調(diào)劑 +4 | 種圣賜 2026-03-28 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0856求調(diào)劑 +13 | zhn03 2026-03-25 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 330分求調(diào)劑 +5 | qzenlc 2026-03-29 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 085602 化工專碩 338分 求調(diào)劑 +12 | 路癡小琪 2026-03-27 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 340求調(diào)劑 +5 | jhx777 2026-03-27 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 286求調(diào)劑 +4 | lim0922 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑求收留 +7 | 果然有我 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 總分322求生物學(xué)/生化與分子/生物信息學(xué)相關(guān)調(diào)劑 +5 | 星沉uu 2026-03-26 | 6/300 |
|