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liuwei78銅蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
提質(zhì)粒的問(wèn)題
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下圖是我提的兩次質(zhì)粒。1、2泳道提的效果很差，不知道提出來(lái)的這個(gè)條帶是缺刻還是雙螺旋？3、4泳道條帶是明顯的，但是不清楚紅線(xiàn)圈內(nèi)的條帶是什么。希望大家?guī)臀医忉屜隆?br />
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【答案】應(yīng)助回帖
liuwei78(金幣+5): 2011-09-08 16:25:34
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樓主這個(gè)圖可以說(shuō)提得慘不忍睹。1，2的產(chǎn)量太低，帶型位置也更接近于缺刻質(zhì)粒；3，4的雜質(zhì)含量太高。所謂的質(zhì)粒3條帶應(yīng)該都在超螺旋質(zhì)粒的上方，下方出現(xiàn)很淡的帶，按分子克隆的說(shuō)法，屬于質(zhì)粒在強(qiáng)變性條件下處理過(guò)長(zhǎng)，變成無(wú)規(guī)則卷曲構(gòu)象，電泳大小約為正常帶型的一半。這種情況多見(jiàn)于煮沸法，堿法提取質(zhì)粒在加入溶液II，也就是NaOH+SDS溶液后靜置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)也會(huì)出現(xiàn)，現(xiàn)在的試劑盒多采用減法，加入裂解液后溶液變澄清即可馬上加入中和液（溶液III），不必等待。但這種變形帶型對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)基本無(wú)影響，也可以完全不理它。 給樓主的建議：注意一下菌體的濃度以及和抽提液的比例，3，4這樣的泳道應(yīng)該記下所用的原始培養(yǎng)基的體積，下次提取的時(shí)候減半；電泳marker不要用DL2000，差的比較遠(yuǎn)。 |
9樓2011-08-09 10:38:31
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4樓2011-08-03 12:56:33
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