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Joannena新蟲 (初入文壇)
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[求助]
病毒RNA提取后做RT-PCR
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| 求助：病毒RNA提取后做RT-PCR后有時(shí)目的條帶特別淺，有時(shí)根本P不出來？求高手指點(diǎn)? |
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
Joannena(金幣+1): 謝謝你，我也考慮是RNA的問題，但是提了幾遍都是這樣，可能還是細(xì)節(jié)注意不夠吧。我再試試 2011-08-09 23:20:23
silicare(金幣+3): 2011-08-10 12:00:07
Joannena(金幣+1): 謝謝你，我也考慮是RNA的問題，但是提了幾遍都是這樣，可能還是細(xì)節(jié)注意不夠吧。我再試試 2011-08-09 23:20:23
silicare(金幣+3): 2011-08-10 12:00:07
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1.用別的，肯定能P出來的基因進(jìn)行PCR，確認(rèn)cDNA沒問題。 2.確定RNA沒問題。跑個(gè)膠看看條帶完整性，測(cè)下OD比值是否在1.9左右。 3.確認(rèn)反轉(zhuǎn)錄沒問題。這步可以拿別的RNA樣品做個(gè)對(duì)照。比較麻煩，一般也不會(huì)有問題�？梢宰詈笈懦� 4.問你身邊的師兄師姐。這是個(gè)小實(shí)驗(yàn)，如果你是新手，可能是不小心操作的問題。 |
2樓2011-08-08 08:07:23
博杰沖
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3樓2011-08-08 09:46:11
dianaofyezi
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4樓2011-08-09 15:20:35
dianaofyezi
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6樓2011-08-09 16:01:35
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
silicare(金幣+3): 鼓勵(lì)新蟲發(fā)帖交流 2011-08-10 12:00:26
silicare(金幣+3): 鼓勵(lì)新蟲發(fā)帖交流 2011-08-10 12:00:26
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1. RNA 提取的步驟相當(dāng)關(guān)鍵， 細(xì)節(jié)一定要注意，比如勤換手套啊， 裂解時(shí)一定要?jiǎng)×艺袷幍鹊?br />
2. 測(cè)模板的OD評(píng)價(jià)下你提取的好不好 3. 可以根據(jù)模板來源的物種不同，選擇不同的逆轉(zhuǎn)錄酶 4. PCR的條件好好摸索 5. 根據(jù)目的條帶大小選擇合適的膠濃度與電泳時(shí)間、電壓 反正都是細(xì)節(jié)，detail is everything.  |
7樓2011-08-09 20:45:27
Joannena
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8樓2011-08-10 00:04:08
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9樓2011-08-10 00:07:48
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10樓2011-08-10 09:52:06
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