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空藍(lán)Y劫新蟲 (小有名氣)
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[求助]
westen blot 轉(zhuǎn)膜
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做westen blot 時(shí)轉(zhuǎn)膜結(jié)束后硝酸纖維素膜上未見預(yù)染的Marker 條帶，翻看濾紙上也沒(méi)見任何顏色，是出什么問(wèn)題了嘛？ 我用的是200mA,1H,，放置時(shí)黑色板朝向黑面，沒(méi)放錯(cuò)。 |
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空藍(lán)Y劫
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silicare(金幣+5): 鼓勵(lì)交流 2011-10-24 11:52:38
silicare(金幣+5): 鼓勵(lì)交流 2011-10-24 11:52:38
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SDS-page電泳時(shí)的預(yù)染Marker，在膠上有清晰的顯示，加樣Buffer的痕跡也很明顯。但轉(zhuǎn)膜后就沒(méi)見任何有顏色的東西了。求原因求指教啊 轉(zhuǎn)硝酸纖維素膜時(shí)用的電流是200mA，1h， 硝酸纖維素膜在放到膠表面前是用甲醇浸泡10秒鐘的，這點(diǎn)老師叮囑過(guò)的，應(yīng)是不容更改的。 轉(zhuǎn)膜時(shí)我是在托水盤中做的轉(zhuǎn)印三明治，所以氣泡的干擾可以排除。 轉(zhuǎn)膜后封閉，封閉后一抗，一抗后PBST，洗三遍，一洗后二抗，然后再PBST洗三次，然后去離子水沖一下，然后染色，結(jié)果是沒(méi)東西啊，呈現(xiàn)的是一片模糊的藍(lán)色。 以前做的時(shí)候有時(shí)候會(huì)見藍(lán)色帶在膜上，有時(shí)候也會(huì)沒(méi)有，但不管有沒(méi)有最后的結(jié)果總會(huì)出條帶的，就是好與差得區(qū)別，但現(xiàn)在直接是不出條帶了！��！ 自我感覺(jué)轉(zhuǎn)膜的嫌疑最大，但不能肯定。另最后染色時(shí)感覺(jué)膜表面油乎乎的，染色液很難均勻涂在表面。 |
10樓2011-08-10 12:35:32
dianaofyezi
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2樓2011-08-09 14:59:23
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3樓2011-08-09 15:12:26
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5樓2011-08-09 16:00:12
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