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酵母重組子篩選引物問題
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| 見論壇里提及篩選重組子的引物有的說用專用檢測引物,有的說一條用特異性引物一條用專用引物。若是一條專用引物和一條特異性引物,但是這兩者的引物長度差近10個堿基。退火溫度也相差好遠,能批嗎,到底是什么樣的情況呢,謝謝大家了 |
【分子生物】EPI帖 |
至尊木蟲 (著名寫手)
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你可以用煮-凍-煮方法試試,很多人說比較簡單的。 煮-凍-煮法:將1mL菌液2 500 X g離心5 min,棄上清,沉淀中加入500 uL TE懸浮沉淀,2500Xg離心3m in;棄上清,重復一次,最后沉淀溶于100 uLTE,沸水浴10 min,-20℃冷凍30 min,再次沸水浴10 min, 1 500 X g離心5 min,取上清為模板作PCR。 |
至尊木蟲 (著名寫手)
至尊木蟲 (著名寫手)
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