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[交流]
RT_pcr后續(xù)PCR時(shí)有時(shí)無(wú) 已有2人參與
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沒(méi)停頓一氣做完RT—pcr后，拿著產(chǎn)物再做pcr，條帶剛開(kāi)始出現(xiàn)一次，后面再也沒(méi)有了。我的引物是用從公司購(gòu)買(mǎi)的DEPC處理的水溶解的，是不是因?yàn)镈EPC分解產(chǎn)生得乙醇抑制酶活性呢？ |
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ganchao1776
至尊木蟲(chóng) (職業(yè)作家)
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小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
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我想說(shuō)的有兩點(diǎn) 1.反轉(zhuǎn)錄pcr釣基因，一次PCR能出來(lái)單一的條帶很不容易；你第一次做的結(jié)果就很好；通常在反轉(zhuǎn)錄后的第一次PCR用普通的Taq酶（優(yōu)點(diǎn)是好p），只要出現(xiàn)明顯的亮帶就割下回收，以回收物分別為模板再次用高保真的DNA聚合酶PCR，通常就可經(jīng)得到很好的結(jié)果了 2.RT-PCR反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物保存后再用會(huì)出很多的問(wèn)題，建議你這一步聚重新做，具體原因我也無(wú)法解釋 |
3樓2011-08-29 01:22:57
2樓2011-08-28 20:40:55
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