 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2667 | 回復(fù): 4 | |||
| 本帖產(chǎn)生 1 個(gè) DRDEPI ，點(diǎn)擊這里進(jìn)行查看 | |||
你好小樂金蟲 (小有名氣)
|
[求助]
求助：關(guān)于輔料在HPLC中雜質(zhì)峰很多，干擾多
|
||
|
最近在做一個(gè)由各種注射用油混合而成的注射油溶液處方，做有關(guān)物質(zhì)時(shí)就是油溶液空白都會(huì)出很多個(gè)峰，有些跟主峰和有關(guān)物質(zhì)的峰很接近，如何是好啊？有沒有哪位大俠有辦法除去油溶液基質(zhì)又可保留藥物的方法��？急死人了！ 大家在研發(fā)過(guò)程中出現(xiàn)輔料有嚴(yán)重干擾情況下除了換輔料意外，都用哪些方法處理的啊？謝謝！ |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 搖曳的星星 |
» 猜你喜歡
藥理學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有58人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 新買的柱子，HPLC走空白時(shí)有很多峰，怎么回事？
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【求助】HPLC低濃度標(biāo)樣雜峰多、基線不平怎么辦？
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 【求助】HPLC有鬼峰出現(xiàn)，急尋解決方案
已經(jīng)有62人回復(fù)
- 【交流】HPLC相同條件下，為何我們檢測(cè)不出主峰雜質(zhì)？
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 【求助】請(qǐng)問雜質(zhì)HPLC檢查時(shí)，如何確定檢測(cè)波長(zhǎng)
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 【求助】HPLC出峰時(shí)間問題
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助】HPLC中關(guān)于乙酸乙酯溶劑峰的問題
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 【求助】HPLC 檢測(cè)出峰時(shí)間有差異？
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【求助】關(guān)于HPLC的溶劑峰時(shí)有時(shí)無(wú)，時(shí)大時(shí)小的問題
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 【求助】HPLC出峰時(shí)間為什么變了？
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 【求助】HPLC出峰問題~
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 【求助】液相色譜分析老是出現(xiàn)一個(gè)雜質(zhì)峰，清洗了很多次了也沒效果！
已經(jīng)有17人回復(fù)
News
專家顧問 (職業(yè)作家)
- DRDEPI: 6
- 應(yīng)助: 366 (碩士)
- 貴賓: 0.025
- 金幣: 5971.2
- 散金: 3206
- 紅花: 155
- 沙發(fā): 24
- 帖子: 4826
- 在線: 677.4小時(shí)
- 蟲號(hào): 1205015
- 注冊(cè): 2011-02-17
- 性別: GG
- 專業(yè): 色譜分析
- 管轄: 生物醫(yī)藥區(qū)
2樓2011-08-25 22:08:07
fuguanbo
木蟲 (正式寫手)
- DRDEPI: 2
- 應(yīng)助: 5 (幼兒園)
- 金幣: 4008.1
- 散金: 105
- 紅花: 8
- 帖子: 583
- 在線: 108.5小時(shí)
- 蟲號(hào): 1349206
- 注冊(cè): 2011-07-18
- 性別: GG
- 專業(yè): 化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
warlen(DRDEPI+1): 2011-08-31 15:28:28
你好小樂(金幣+2): 2011-09-29 16:29:47
你好小樂(金幣+2): 2011-09-29 16:29:47
|
常見色譜分析問題解疑 一、產(chǎn)生前沿和拖尾的原因一般有哪些？ （1）拖尾： 1.干擾峰，優(yōu)化條件分離 2 色譜柱塌陷，更換色譜柱 3 流動(dòng)相pH不合適，調(diào)節(jié)pH值 4 管路沒有接好，存在較大的死體積，可以重新接一下 （2）前沿： 1 溶劑選擇不合適，選擇合適的溶劑 2 樣品過(guò)載，降低進(jìn)樣量 3 柱溫太低，升高柱溫 4 色譜柱損壞，更換色譜柱 5 干擾峰，優(yōu)化色譜條件分離 可能的問題：1.柱子問題2.流動(dòng)相不恰當(dāng)3.定容樣品的溶劑不合適 產(chǎn)生峰前沿的原因：柱過(guò)載，柱頭塌陷，溶劑選擇不對(duì) 產(chǎn)生峰拖尾的原因：存在雜質(zhì)未分開，柱污染，柱子選擇不對(duì)。 拖尾峰與柱子有關(guān)，可能是過(guò)載，稀釋樣品再做，或換新柱做吧 一般產(chǎn)生托尾峰往往是有機(jī)性相近雜質(zhì)沒有分開，可以優(yōu)化分析方法，或更換柱子試一試；也可能由于柱子使用時(shí)間太久柱效下降出現(xiàn)塌陷等原因；再有也會(huì)根樣品本身性質(zhì)有關(guān)，基團(tuán)需要流動(dòng)相中添加能與之結(jié)合優(yōu)化峰形的化學(xué)物質(zhì)，要根據(jù)具體情況而定。柱子可能污染了吧，溶劑也可能有，或柱效下降。 圖譜前沿和拖尾的原因主要是流動(dòng)相選擇不合適，可以相應(yīng)調(diào)整流動(dòng)相的極性，或者適當(dāng)加入酸來(lái)調(diào)整，可以得到較好的改善。一般來(lái)講，酸堿在流動(dòng)相中對(duì)于前沿和拖尾影響較大。 柱前沿是可能因?yàn)橹d，拖尾是可能因?yàn)闃悠繁晃廴荆x擇合適的流動(dòng)相，調(diào)節(jié)好PH能夠改善這以情況。 二、怎樣避免拖尾和前沿，有何措施？ 選擇合適的色譜條件和色譜柱，就可以避免峰拖尾和前沿 在處理樣品時(shí)選擇合適的流動(dòng)相最為重要，所以在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí)充分了解所要分離的物質(zhì)的化學(xué)性質(zhì)和溶解度、極性等相關(guān)問題，摸條件時(shí)找到較好的流動(dòng)相，是避免拖尾峰出現(xiàn)的最好方法。 避免拖尾和前沿主要要控制好溶質(zhì)的量，每種色譜方法有一定的線性范圍，超過(guò)這一范圍不對(duì)稱峰則會(huì)出現(xiàn)。 要看是由于什么原因造成的： 分析物本身的性質(zhì)：這類問題首先要選擇合適的色譜柱，另樣品的前處理非常重要，部分樣品在分析過(guò)程中分解，那肯定是拖尾的。 色譜柱問題：主要由于色譜柱柱效下降等引起，維護(hù)色譜柱或者更換 流動(dòng)相：流動(dòng)相未起到抑制拖尾或者前沿的作用，應(yīng)添加適當(dāng)緩沖劑如三乙胺、醋酸等。 三、一般拖尾比較厲害的是生物堿類成分的檢測(cè)，對(duì)此類物質(zhì)防止拖尾有什么好的建議嗎？ 對(duì)于生物堿類，應(yīng)該選用封端了的色譜柱，減少硅羥基的作用，還有就是調(diào)節(jié)流動(dòng)相的PH值來(lái)避免拖尾 對(duì)于生物堿類成分的分離關(guān)鍵在于加入的酸的量，因?yàn)槟愕米尦煞直簧V柱吸附后，能夠很好的溶解在流動(dòng)相中，即解吸附下來(lái)才行啊，所以注意你的酸的加入量吧！還有就是選擇合適的色譜柱，最重要嘍！ 分離堿性物質(zhì)，易產(chǎn)生拖尾，一般我們都是在流動(dòng)相中加點(diǎn)三乙胺（即堿性物質(zhì)）. 生物堿類液相色譜一般都會(huì)在流動(dòng)相里加入少量堿（二乙胺或氨水等），使流動(dòng)相的PH偏堿性。不過(guò)用普通的C18柱來(lái)分析可能進(jìn)不了幾針柱效就不行了，考慮使用寬PH范圍的C18柱。 關(guān)于生物堿薄層問題，可以對(duì)于薄層板的話可以用10%NaOH+CMC-Na溶液進(jìn)行鋪板，還可以適當(dāng)調(diào)節(jié)展開劑PH值來(lái)防治生物堿拖尾。 應(yīng)該加三乙胺吧，及三氟乙酸等調(diào)節(jié)PH值，使用氨基的色譜柱啊，不管怎么說(shuō)首先考慮的是色譜柱的選擇。 四、 用HPLC進(jìn)行分析時(shí)保留時(shí)間有時(shí)發(fā)生漂移，有時(shí)發(fā)生快速變化，原因何在？如何解決？ 關(guān)于漂移問題： ① 溫度控制不好，解決方法是采用恒溫裝置，保持柱溫恒定 ② 流動(dòng)相發(fā)生變化，解決辦法是防止流動(dòng)相發(fā)生蒸發(fā)、反應(yīng)等 ③ 柱子未平衡好，需對(duì)柱子進(jìn)行更長(zhǎng)時(shí)間的平衡 關(guān)于快速變化問題 ① 流速發(fā)生變化，解決辦法是重新設(shè)定流速，使之保持穩(wěn)定 ② 泵中有氣泡，可通過(guò)排氣等操作將氣泡趕出。 ③ 流動(dòng)相不合適，解決辦法為改換流動(dòng)相或使流動(dòng)相在控制室內(nèi)進(jìn)行適當(dāng)混合 五、液相色譜中峰出現(xiàn)拖尾或出現(xiàn)雙峰的原因是什么？ ① 篩板堵塞或柱失效，解決辦法是反向沖洗柱子，替換篩板或更換柱子。 ② 存在干擾峰，解決辦法為使用較長(zhǎng)的柱子，改換流動(dòng)相或更換選擇性好的柱子 ③ 可能柱超載，減少進(jìn)樣量。 六、HPLC靈敏度不夠的主要原因及解決辦法 ① 樣品量不足，解決辦法為增加樣品量 ② 樣品未從柱子中流出。可根據(jù)樣品的化學(xué)性質(zhì)改變流動(dòng)相或柱子 ③ 樣品與檢測(cè)器不匹配。根據(jù)樣品化學(xué)性質(zhì)調(diào)整波長(zhǎng)或改換檢測(cè)器 ④ 檢測(cè)器衰減太多。調(diào)整衰減即可。 ⑤ 檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)太大。解決辦法為降低時(shí)間參數(shù) ⑥ 檢測(cè)器池窗污染。解決辦法為清洗池窗。 ⑦ 檢測(cè)池中有氣泡。解決辦法為排氣。 ⑧ 記錄儀測(cè)壓范圍不當(dāng)。調(diào)整電壓范圍即可。 ⑨ 流動(dòng)相流量不合適。調(diào)整流速即可。 ⑩ 檢測(cè)器與記錄儀超出校正曲線。解決辦法為檢查記錄儀與檢測(cè)器，重作校正曲線。 七、做HPLC分析時(shí)，柱壓不穩(wěn)定，原因何在？如何解決？ ① 泵內(nèi)有空氣，解決的辦法是清除泵內(nèi)空氣，對(duì)溶劑進(jìn)行脫氣處理； ② 比例閥失效，更換比例閥即可； ③ 泵密封墊損壞，更換密封墊即可； ④ 溶劑中的氣泡，解決的辦法是對(duì)溶劑脫氣，必要時(shí)改變脫氣方法； ⑤ 系統(tǒng)檢漏，找出漏點(diǎn)，密封即可； ⑥ 梯度洗脫，這時(shí)壓力波動(dòng)是正常的。 八、最近更換了另一種牌號(hào)的ODS柱，雖然分離情況仍可以，但保留時(shí)間不能重現(xiàn)，為什么？ 這是因?yàn)楸环治鑫锟赡芫哂行纬蓺滏I的能力。盡管過(guò)去幾年來(lái)，填料的制造技術(shù)有了極大的提高，但不同的廠商的ODS填料表面硅醇基的濃度不同。正是這些硅醇基可能與樣品發(fā)生相互作用。因此，同一被分析物中的各組分在不同牌號(hào)的ODS柱上的相對(duì)保留時(shí)間就可能不同。在流動(dòng)相中加入少量競(jìng)爭(zhēng)物，如三乙基胺（TEA），將會(huì)使硅醇基的成鍵能力飽和，從而能保證不同牌號(hào)柱子上的相對(duì)保留時(shí)間具有較好的重現(xiàn)性。 如分離情況可以，系統(tǒng)穩(wěn)定，達(dá)到系統(tǒng)適用性要求，就不必保留時(shí)間的重現(xiàn)。 九、購(gòu)買的HPLC柱驗(yàn)收測(cè)試時(shí)柱壓過(guò)高，請(qǐng)問為什么？ 柱壓過(guò)高是HPLC柱用戶最常碰到的問題。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的問題，您可按下面步驟檢查問題的起因。 ① 拆去保護(hù)預(yù)柱，看柱壓是否還高，否則是保護(hù)柱的問題，若柱壓仍高，再檢查； ② 把色譜柱從儀器上取下，看壓力是否下降，否則是管路堵塞，需清洗，若壓力下降，再檢查； ③ 將柱子的進(jìn)出口反過(guò)來(lái)接在儀器上，用10倍柱體積的流動(dòng)相沖洗柱子，（此時(shí)不要連接檢測(cè)器，以防固體顆粒進(jìn)入流動(dòng)池）。這時(shí)，如果柱壓仍不下降，再檢查；只用于使用過(guò)的柱子。 ④ 更換柱子入口篩板，若柱壓下降，說(shuō)明您的溶劑或樣品含有顆粒雜質(zhì)，正是這些雜質(zhì)將篩板堵塞引起壓力上升。若柱壓還高，請(qǐng)與廠商聯(lián)系。一般情況下，在進(jìn)樣器與保護(hù)柱之間接一個(gè)在線過(guò)濾器便可避免柱壓過(guò)高的問題，SGE提供的Rheodyne 7315型過(guò)濾器就是解決這一問題的最佳選擇。 十、色譜雙峰產(chǎn)生的可能及判斷和處理 HPLC分析中，在色譜柱正常，樣品靈敏度足夠，分析方法合適，色譜峰在出峰時(shí)間較短的條件下（不包括梯度），峰型應(yīng)對(duì)稱而尖銳。但是，在對(duì)樣品了解程度不夠，方法不妥，樣品處理方法及進(jìn)樣方式不合理下，會(huì)出現(xiàn)各種意想不到的問題，而對(duì)色譜峰難以作出合理的解釋，尤其對(duì)于新手更是如此。下面根據(jù)本人幾年工作的體會(huì)，提出一些看法，向同仁指教。 色譜雙峰指的是明是一種物質(zhì)，但在色譜圖中出現(xiàn)雙峰，而表明含二種物質(zhì)。我將這種情況分為四種原因。 1、色譜柱 如果你分析樣品時(shí)發(fā)現(xiàn)每個(gè)色譜峰都雙峰出現(xiàn)（出峰越快，雙峰的可能性會(huì)減少），尤其采用單一純物質(zhì)時(shí)，可以肯定色譜柱出問題－柱頭受損或柱頭固定相變臟或流失。如果進(jìn)樣量少，原來(lái)色譜柱正常，色譜峰的形狀多為一大峰帶一小峰，不一定拖尾，這一般應(yīng)是柱頭受堵，將色譜柱反過(guò)來(lái)接，用流動(dòng)相沖洗或酸洗或其它溶劑，將堵在柱頭的殘留物沖掉，再反過(guò)來(lái)，一般情況下就行了。當(dāng)然不反沖，正沖有時(shí)也會(huì)正常的。如果峰拖尾，雙峰強(qiáng)弱相差不大，柱頭固定相變臟或流失可能性更大，這是可以將進(jìn)樣那頭擰開，將微孔濾片超聲，柱頭刮去一部分填料，重新填上新填料擰緊，不過(guò)這種活，需要一定技術(shù)，同時(shí)不能老干那種事，否則用不了幾次，色譜柱就會(huì)應(yīng)柱效很低而報(bào)廢。 2、溶劑極性及進(jìn)樣量 許多HPLC分析者對(duì)此可能不以為然，一般的HPLC的書籍和文獻(xiàn)都不會(huì)提到這方面的內(nèi)容，而這確是雙峰產(chǎn)生的一個(gè)很重要的原因。目前HPLC分析多為反相色譜，流動(dòng)相多為甲醇、乙腈、水，加各種添加劑以改善分離性能。樣品一般用與流動(dòng)相相溶的溶劑溶解。最佳的溶解方法是用流動(dòng)相溶解，但是很多情況是不一致的。當(dāng)用溶劑極性強(qiáng)度大的試劑，如純甲醇、純乙腈，純乙醇，而分析體系中以水為主，樣品進(jìn)樣量大，如定量管為20ul，此條件下完全可以肯定，單一的純物質(zhì)出雙峰，第二峰比第一峰�。看味疾惶粯樱�，且拖尾，保留時(shí)間會(huì)提前(相對(duì)進(jìn)樣量少而言)，將進(jìn)樣量減少一半以上，峰型將變?yōu)檎！＿@是樣品的溶劑與流動(dòng)相極性相差太大，而流動(dòng)相來(lái)不及將其稀釋達(dá)到平衡造成的。上面提到進(jìn)樣量造成雙峰的一個(gè)原因，另一個(gè)原因是，進(jìn)樣量不一定大，但絕對(duì)量很大，色譜圖上的雙峰緊靠在一起，基本上齊高，不拖尾（如果出峰很快，也可能是色譜柱問題）。將樣品稀釋再進(jìn)樣就可以了，這是由于進(jìn)樣量過(guò)大，色譜柱過(guò)載造成的。 3、樣品的特性 有些樣品由于其化學(xué)結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)，存在互變異構(gòu)現(xiàn)象，而這種互變異構(gòu)體無(wú)法分開，而是以一個(gè)動(dòng)態(tài)平衡存在。在色譜分析時(shí)，在一個(gè)特定的條件下，一種物質(zhì)將出現(xiàn)雙峰，雙峰靠的很近，基本齊高，不拖尾，條件稍一變化，尤其pH，雙峰現(xiàn)象將消失，如紅霉素等。有的樣品紫外的色譜圖上看不到雙峰，但在LC－MS下，用質(zhì)譜檢測(cè)器，其質(zhì)譜的總離子流圖上較明顯，例如我分析過(guò)的農(nóng)藥啶蟲瞇（吡蟲清）。 4、參數(shù) 記錄的參數(shù)一般都內(nèi)定的，不必修改，但GC和HPLC的參數(shù)是不完全一致的，例如C－R3A數(shù)據(jù)記錄儀上的一般記錄時(shí)間間隔GC為2ms，HPLC為5ms，如果記錄間隔時(shí)間縮短，一個(gè)峰將變?yōu)槎䝼�(gè)峰或更多。 系統(tǒng)堵塞 問：我的系統(tǒng)壓力比它應(yīng)該的壓力高很多，是什么原因？ 答：首先，讓我們檢查一下你的前提，你怎么知道壓力應(yīng)該是多少？ 問：之前同樣的柱子，同樣的流動(dòng)相，同樣溫度壓力只有2000PSI�，F(xiàn)在是兩部了。我把泵壓的上限設(shè)為4000PSI，泵停了。 答：很好你有以前的參考數(shù)據(jù)，我們可以從這里開始排查故障。壓力變大，原因很多。首先，流動(dòng)相的粘度可能不對(duì)。其次，系統(tǒng)某個(gè)地方可能堵了。后者比較常見，但是在我們拆系統(tǒng)前，先檢查下其他的可能。 你確定你的流動(dòng)相是對(duì)的？如果用的是自動(dòng)混合，你溶液有沒有放錯(cuò)？例如把甲醇和乙腈弄混了（由于兩者與水混合液的粘度差異很容易導(dǎo)致壓力不同）。 如果使用了柱溫箱加熱，確認(rèn)一下它有沒有工作。溫度每變10℃粘度變化25%。所以如果你本來(lái)要開60℃，但是柱溫箱沒有工作，這樣壓力就會(huì)翻倍了。 問：OK，這個(gè)很容易檢查，其它還有哪些要檢查的？ 答：我經(jīng)常問這個(gè)問題，壓力變大是在長(zhǎng)期分析中慢慢出現(xiàn)還是突然出現(xiàn)的。如果是突然出現(xiàn)的，可能是有些錯(cuò)誤發(fā)生了。讓我們來(lái)檢查一些東西，從簡(jiǎn)單的開始：柱子填料的顆粒大小對(duì)不對(duì)？柱子壓力與顆粒大小的平方成比例變化。如果你用5um的柱子代替10um的柱子，就可以解釋壓力的增加了。 不是這種情況，那么就有地方堵住了。首先卸掉柱子接二通，保護(hù)柱和柱前過(guò)濾器不要下下來(lái)。我們要檢查的一個(gè)可能是流動(dòng)相不相容，如果接分析柱在后面的操作中可能對(duì)其有損。不連柱子，檢查壓力，如果還有1500多psi，那么是其他地方堵了，柱子是好的。我們可以在流路上一個(gè)一個(gè)斷開看哪里壓力最大。通常換一個(gè)部件比清洗更有效，但我們不是隨時(shí)都有備用的，所以可以考慮清洗。如果我們知道要除掉的是什么東西，那么就很容易知道怎么洗。假設(shè)是濾頭堵了，可能是上一次的流動(dòng)相沒有排完，與新的流動(dòng)相不相溶造成的�？赡苁蔷彌_鹽析出了。這種情況只要用能溶解析出鹽的溶液沖洗堵塞部位一段時(shí)間就可以了。 如果是分析柱或保護(hù)柱突然堵塞，就要檢查柱子的保存溶劑。保存溶劑可能與流動(dòng)相不相溶而導(dǎo)致緩沖鹽析出。或者柱子用含鹽的流動(dòng)相保存，而柱塞松動(dòng)，導(dǎo)致流動(dòng)相部分蒸發(fā)，有鹽析出。這時(shí)要用能溶解該鹽的流動(dòng)相低流速?zèng)_洗柱子來(lái)恢復(fù)活性。 問：我的情況是在運(yùn)行序列中間突然出現(xiàn)的，這是怎么回事呢？ 答：這種情況可能是系統(tǒng)的某部分被積累的小顆粒堵塞了。小顆�？赡軄�(lái)源于密封圈或樣品，可能是樣品不溶于流動(dòng)相或者樣品強(qiáng)烈的吸附在保護(hù)柱或分析柱（沒用保護(hù)柱）上。這通常是樣品中大分子量的組分，而你沒有去除或者只是部分去除掉了，如血清樣品中的蛋白質(zhì)，制劑中的輔料或食品中的高分量組分。 如果你用了柱前過(guò)濾器和保護(hù)柱，讓我們依次下下來(lái)，測(cè)量系統(tǒng)壓力。這樣，我們應(yīng)該可以很快找到堵塞的部位。如果是保護(hù)柱和柱前過(guò)濾器堵了，最好更換掉。它們就是用來(lái)保護(hù)分析柱的。想要清洗它們接著使用是劃不來(lái)的，因?yàn)橄麓嗡鼈兛赡芫筒荒軗踝∧切┪廴疚锪�，而柱子就要弄壞了�?br /> 如果是分析柱堵了，最好是清理一下。但是最好的挽救是預(yù)防，考慮加個(gè)柱前過(guò)濾器，最好加個(gè)保護(hù)柱。如果問題來(lái)自樣品，就要把樣品過(guò)濾，或者用固相萃取除掉污染物。 如果有備用的柱子濾片，換掉柱頭進(jìn)口的濾片。沒有就把它拿下來(lái)，超聲清洗。這只對(duì)硅膠柱有用，如果是聚合柱（polymeric column），它的填料是有內(nèi)壓的，你一拿開濾片填料就會(huì)泄漏出來(lái)。這時(shí)如果手頭有備用的濾片，就要快速的更換并重新封好柱子，如果沒有就不要開聚合柱。 如果更換或清洗后壓力沒有降低，那么可能是有東西吸附在填料表面或者滲透到了柱子中間了。這時(shí)就要用能溶解或解吸收潛在污染物的溶液低流速?zèng)_洗柱子。柱子廠家都有介紹用一系列強(qiáng)度遞增的溶液來(lái)完成這個(gè)工作的。對(duì)反相柱來(lái)說(shuō)，可以采取如下程序：水，甲醇，THF，二氯甲烷，甲醇再回到水。對(duì)正相柱程序的極性相反：二氯甲烷，THF，水，甲醇，二氯甲烷。如果還是沒用，可以考慮反向沖洗柱子。但是到了這個(gè)時(shí)候最好拿起電話去訂購(gòu)一根新柱子。 柱子污染 問：我的柱子的壽命不是很長(zhǎng)。進(jìn)了大概500針之后，峰就變寬了，還有拖尾。以前的柱子都能進(jìn)1000針左右，這根柱子哪里有問題？ 答：很有可能這根柱子啥問題都沒有。在我們?cè)敿?xì)討論之前，我先問你一個(gè)問題，你用了保護(hù)柱沒有？ 問：沒有，但是我用了柱前過(guò)濾器。這也可以保護(hù)柱子，不是嗎？ 答：很不幸，柱前過(guò)濾器只能起到部分的保護(hù)作用。他們能夠除去流動(dòng)相中的微粒。這些微粒來(lái)自于樣品或者液相系統(tǒng)的運(yùn)動(dòng)部位。柱前過(guò)濾器不能除去比過(guò)濾器小的顆粒，這些顆粒會(huì)吸附到填料表面。大部分情況下這些顆粒來(lái)自于樣品。你的樣品是什么？ 問：是固相萃取后的血漿。我承認(rèn)血漿的組分會(huì)使柱子壽命迅速降低，但是我的色譜圖很干凈，背景干擾很小。更重要的是，以前我們能夠進(jìn)1000針，只是現(xiàn)在的污染速度更快了。 答：在很多情況下，樣品的配制過(guò)程不是100%的完美。畢竟，還是有一些干擾出現(xiàn)在你的色譜圖中。同樣，盡管你很小心的配制，但是還是有一些蛋白質(zhì)殘留在樣品中。蛋白質(zhì)會(huì)強(qiáng)吸附在填料表面，慢慢聚集在柱頭。另外，背景污染物的濃度會(huì)因樣品而改變，因此在我看來(lái)，柱子壽命因一個(gè)或兩個(gè)原因而減少了是正常的。我的建議是使用保護(hù)柱來(lái)保護(hù)你的柱子。 問：我以前也用過(guò)保護(hù)柱，但是效果不是很好。峰形從一開始就很差。因此我認(rèn)為加保護(hù)柱不是一個(gè)好方法。 答：這要看你選的是什么類型的保護(hù)柱。我通常建議是用和分析柱一樣填料的保護(hù)柱。這樣相當(dāng)于把你的分析柱延長(zhǎng)了，而污染物則被保護(hù)柱而不是分析柱所吸附。如果填料裝的好，對(duì)分離效果的影響是微乎其微的。有些情況可能還會(huì)更好一點(diǎn)。但這不是重點(diǎn)，重點(diǎn)是我們保護(hù)了分析柱。 如果選用與分析柱填料不一樣的保護(hù)柱，你就會(huì)看到峰形變差。另外，你也不知道保護(hù)柱的保護(hù)情況。這都是因?yàn)椴煌盍系谋Ａ裟芰Σ灰粯訉?dǎo)致的。所以，最好還是選用填料一致的分析柱和保護(hù)柱。可以保證你得到最好的保護(hù)和最小的峰形失真。 問：?jiǎn)栴}是保護(hù)柱很貴。說(shuō)說(shuō)柱子的再生和沖洗過(guò)程？ 答：我通常把柱子再生作為最后的選項(xiàng)，除非沒有其他選擇。再生問題是如果你知道污染物是什么，那么效果很好。在大部分情況下我們并不了解只能猜測(cè)柱子的污染物。另外，有時(shí)候污染物很難清除掉。你的問題就是這樣的例子。我推測(cè)污染物是一些細(xì)小的蛋白質(zhì)。建立一個(gè)很好的再生程序也是不容易的。廠家的說(shuō)明書上有一些通用的清洗程序，但是不一定對(duì)你有幫助。在這些程序中，你要用一系列的溶劑沖洗柱子，這些溶劑可能會(huì)除去污染物。這樣花費(fèi)相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間，并且不一定奏效。 所以，我還是傾向于使用保護(hù)柱。他們可以捕獲能夠富集在分析柱上的污染物。他們也不是那么的貴：只有分析柱的一小部分。只需幾分鐘就能更換分析柱，而要再生一根柱子要好幾個(gè)小時(shí)。時(shí)間的節(jié)約是明顯的，同時(shí)心情也好。如果你按照上面說(shuō)的規(guī)則做，可以保證你工作的效率，避免很多頭疼的事情 色譜柱使用壽命 問：我的色譜柱進(jìn)樣大概100針后峰形變差了，踏板數(shù)很低，怎么回事？ 答：100針確實(shí)很少，一般情況下使用時(shí)間會(huì)長(zhǎng)很多的。首先我們要確認(rèn)你的使用條件是不是導(dǎo)致色譜柱壽命下降的原因。 兩種基本情況： 1 在相同實(shí)驗(yàn)中以前使用的色譜柱壽命長(zhǎng)很多 2 在本實(shí)驗(yàn)中用過(guò)的所有的色譜柱在使用相同次數(shù)后全部損壞 如果是第一種情況，應(yīng)該檢查一下實(shí)驗(yàn)是否保持一致。樣品的組成改變了嗎？樣品中強(qiáng)吸收的污染物會(huì)破壞色譜柱的柱效�；蛘吖苈返拿芊馊κ欠裢旰�？脫落的密封圈會(huì)堵塞色譜柱過(guò)濾器和填料的頂層，從而影響樣品的分布。 如果可以確認(rèn)色譜條件沒有變化，那么可以推測(cè)是柱床松動(dòng)的原因。在實(shí)驗(yàn)室和運(yùn)輸過(guò)程中色譜柱劇烈的震動(dòng)都會(huì)導(dǎo)致柱床松動(dòng)。（色譜柱有沒有掉到地上？）或者也有可能使生產(chǎn)商的問題。而且這種問題標(biāo)準(zhǔn)色譜柱檢測(cè)中心是檢測(cè)不出來(lái)的，只有在用過(guò)一段時(shí)間后才會(huì)顯露出來(lái)。這種情況生產(chǎn)商會(huì)免費(fèi)替換色譜柱。 問：那些生產(chǎn)商真好，但是我的情況不是這樣的。我的色譜柱總是用不了多長(zhǎng)時(shí)間。有時(shí)候100針，有時(shí)候200針。200針還可以忍受，但是100針太差了。色譜柱開銷太大了，我該怎么辦？ 答：我完全同意你所說(shuō)的。我們必須要找到原因然后看看我們能做些什么。 最大可能是樣品中的成分吸附在色譜柱的頂端。可能是在流動(dòng)相中不溶的沉淀物或者是強(qiáng)吸收的物質(zhì)。隨著進(jìn)樣的增加這些污染物在色譜柱頂端累積，阻止樣品正常吸附和擴(kuò)散。從而導(dǎo)致峰形變差。通常這種問題和柱壓升高同時(shí)出現(xiàn)。 問：嗯，可能就是這個(gè)原因。我應(yīng)該怎么避免這種問題呢？ 答：有幾種方法可以采用。一，采用合適的樣品準(zhǔn)備技術(shù)處理樣品。用和分析柱相似的固相萃取柱進(jìn)行固相萃�。⊿PE：solid phase extraction）1效果很好。 另外一種非常有效的方法是使用保護(hù)柱。保護(hù)柱是作為犧牲柱裝在色譜柱前使用的，出現(xiàn)問題的時(shí)候就會(huì)被替換掉。為了獲得最好的分析效果，保護(hù)柱的填料和裝填技術(shù)必須和分析柱一樣。如果用不同品牌的填料就不能獲得最佳的分析性能和保護(hù)作用。不要用大些的顆粒型號(hào)，大的顆�；蜓b填不好的預(yù)柱會(huì)因譜帶擴(kuò)展而導(dǎo)致分離效果變差。 問：使用預(yù)柱聽起來(lái)不錯(cuò)，還有其他方法嗎？ 答：還有其他一些方法，但是他們都有缺陷。 我不提倡用那些可能溶解色譜柱頂端污染物的溶劑去沖洗柱子。很多情況下，這個(gè)方法是沒有作用的。例如，如果沉積在色譜柱頂端的污染物是蛋白質(zhì)，你沖洗的時(shí)候他們已經(jīng)變性很久了，甚至可能交聯(lián)在一起，變得難以溶解。此外，通常色譜柱是處于水解平衡狀態(tài)，而每次沖洗都會(huì)除掉水解鍵合相。因此，重復(fù)的沖洗柱子會(huì)加速柱子的老化。而且，沖洗后還要用流動(dòng)相平衡柱子，如果是做離子對(duì)色譜的話會(huì)消耗大量的時(shí)間。 另一個(gè)經(jīng)常用的方法是反沖柱子。如果用和流動(dòng)相不同的溶劑沖洗會(huì)產(chǎn)生和上面相同的問題。如果用流動(dòng)相的話，需要很長(zhǎng)的時(shí)間才能除去污染物，也有可能根本就沒作用。同時(shí)，反沖柱子會(huì)削弱柱子。盡管現(xiàn)在的裝填技術(shù)可以使柱子承受反沖，但是一般情況下不要采取這種做法。 問：那么最好的建議就是使用預(yù)柱了？ 答：絕對(duì)是。預(yù)柱也沒那么貴-一般隨品牌和型號(hào)的不同價(jià)格在10$-50$之間，而他們所保護(hù)的柱子的價(jià)格是預(yù)柱的10倍左右啊。而且他們還可以避免其他來(lái)源的污染物的，這些污染物更加難以發(fā)現(xiàn)。這些來(lái)源包括比如流動(dòng)相中的灰塵，泵脫落的密封圈的碎片，或者從流動(dòng)相吸附的污染物等等。其中有些難以對(duì)付，而保護(hù)柱就可以阻擋這些。 問：還有其他縮短柱子使用壽命的原因嗎？ 答：有的，但是只要你按照生產(chǎn)商的說(shuō)明使用柱子的話一般很少發(fā)生。 有一個(gè)可能就是流動(dòng)相pH超出使用范圍而導(dǎo)致的柱子坍塌。樣品用強(qiáng)酸或強(qiáng)堿溶解的話也會(huì)發(fā)生 另外，一些特別的柱子有特別注意的地方 例如氨基柱可以和醛，酮反應(yīng)。氨基柱在不含緩沖鹽的水溶液中會(huì)顯強(qiáng)堿性，分解部分硅膠。 暴露在錯(cuò)誤溶劑中的柱子也會(huì)發(fā)生坍塌。因?yàn)檫@些柱子是基于非常松散的結(jié)構(gòu)。他們是因顆粒之間的黏著而部分的結(jié)合在一起的。如果置于能破化這種黏著的流動(dòng)相中，柱床很有可能會(huì)坍塌。氰基柱在中性溶液，苯基柱在THF中有時(shí)就會(huì)發(fā)生這種問題。這也是不要沖洗柱子的另一個(gè)理由。 |
3樓2011-08-26 12:28:04
li_yeqing
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 9 (幼兒園)
- 金幣: 818
- 帖子: 73
- 在線: 21.2小時(shí)
- 蟲號(hào): 1378660
- 注冊(cè): 2011-08-24
- 性別: GG
- 專業(yè): 色譜分析
4樓2011-08-30 16:56:03
yugijiang
木蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 661 (博士)
- 貴賓: 0.005
- 金幣: 4018.4
- 紅花: 11
- 帖子: 1790
- 在線: 178小時(shí)
- 蟲號(hào): 416091
- 注冊(cè): 2007-06-29
- 性別: GG
- 專業(yè): 藥物分析
5樓2012-05-28 21:31:07
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 你好小樂 的主題更新
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 302求調(diào)劑 +4 | 呼呼呼。。。。 2026-03-17 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 一志愿天津大學(xué)化學(xué)工藝專業(yè)（081702）315分求調(diào)劑 +6 | yangfz 2026-03-17 | 6/300 |
|
|
[考研] 328求調(diào)劑，英語(yǔ)六級(jí)551，有科研經(jīng)歷 +3 | 生物工程調(diào)劑 2026-03-16 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 293求調(diào)劑 +6 | 世界首富 2026-03-11 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 290求調(diào)劑 +3 | p asserby. 2026-03-15 | 4/200 |
|
|
|
[碩博家園] 深圳大學(xué)碩士招生（2026秋，傳感器方向，僅錄取第一志愿） +4 | xujiaoszu 2026-03-11 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 材料與化工304求B區(qū)調(diào)劑 +7 | 邱gl 2026-03-11 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 286求調(diào)劑 +3 | lemonzzn 2026-03-16 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 326求調(diào)劑 +4 | 諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)覬?/a> 2026-03-15 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 0703一志愿211 285分求調(diào)劑 +5 | ly3471z 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 288求調(diào)劑 +4 | 奇點(diǎn)0314 2026-03-14 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 中科大材料與化工319求調(diào)劑 +3 | 孟鑫材料 2026-03-14 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料與化工 323 英一+數(shù)二+物化，一志愿：哈工大 本人本科雙一流 +4 | 自由的_飛翔 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 331求調(diào)劑（0703有機(jī)化學(xué) +5 | ZY-05 2026-03-13 | 6/300 |
|
|
|
[基金申請(qǐng)]
有必要更換申報(bào)口嗎
 20+3
|
fannyamoy 2026-03-11 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 四川大學(xué)085601材料工程專碩 初試294求調(diào)劑 +4 | 祝我們好在冬天 2026-03-11 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +4 | 芬達(dá)46 2026-03-12 | 4/200 |
|
|
|
[論文投稿]
投稿問題
5+4
|
星光燦爛xt 2026-03-12 | 6/300 |
|
|
|
[考博] 26讀博 +4 | Rui135246 2026-03-12 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 081200-11408-276學(xué)碩求調(diào)劑 +3 | 崔wj 2026-03-12 | 4/200 |
|