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青菜小蟲銀蟲 (著名寫手)
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[求助]
PCR ， 雙酶切，連接問題
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| 請問一下PCR用高保真的酶P 3000多的片段，突變率大嗎？還有PCR 的目的片段純化后，雙酶切效果如何？把兩個目的片段同時往載體上連的話，一個片段是3000bp，一個是2000bp，載體5380bp，用的是TAKARA的連接試劑盒，兩個片段的合適比例是多少�。� |
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 【分子生物】EPI帖 |
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zhangxn2010
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9樓2011-08-28 08:21:40
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【答案】應(yīng)助回帖
青菜小蟲(金幣+5): 謝謝你的解答。 2011-08-27 14:26:48
1949stone(MolEPI+1): 這個要epi 13k的 可以么？ 2011-08-27 21:22:53
1949stone(MolEPI+1): 這個要epi 13k的 可以么？ 2011-08-27 21:22:53
我們實驗室擴增長片段常用的是Takara的primer star，有記錄的是7.3k。沒錯堿基，樓主可以試一下！目的片段純化后如果量足夠大，酶切也沒問題的，別忘了加上保護(hù)堿基。兩個大片段往載體上連接難度可能大些，但也能成功，曾經(jīng)連接過14k，1k，700bp的和7.3k，3.8k，700bp的能連上但費了不少功夫！關(guān)于比例這個樓主最好咨詢一下技術(shù)顧問，偶也沒太多的經(jīng)驗，就是多做了些連接轉(zhuǎn)化就搞定了！ |
2樓2011-08-27 12:08:07
青菜小蟲
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3樓2011-08-27 14:53:25
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4樓2011-08-27 14:57:28
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